BUNSEN本生分享：荧光定量PCR耗材的选择

　　PCR是分子生物学研究的基础实验，用于在短时间内将单拷贝的目标DNA序列扩增至数百万拷贝。除了选择可靠的PCR仪外，用于PCR反应的塑料耗材除考虑兼容性，还要求避免存在污染物和抑制剂，同时又具有可保障最佳PCR效果的高质量。因此，如何选择作为用户，了解如何选择PCR / qPCR耗材，显得尤其重要。

　　第一步，选择通量

　　根据样品数量选择通量，PCR耗材的最常见规格为：

　　管：0.5 mL, 0.2 mL, 0.1 mL

　　96 孔板：0.2 mL, 0.1 mL

　　384 孔板：0.02 mL

　　单管

　　8联管

　　96孔板

　　384孔板

　　第二步， 选择加样体积：不同类型管，可供选择的容量体积不同。

　　单管: 0.5 mL, 0.2 mL(标准), 0.1 mL(低容，或称快速)

　　8联管： 0.2 mL(标准), 0.1 mL(低容，或称快速)

　　96 孔板：0.2 mL(标准), 0.1 mL(低容，或称快速)

　　384 孔板：0.02 mL

　　“(低容)”意味着高度更低。 低容耗材更短的设计程度减少了反应体系上方的空间，降低了蒸发的影响并提高了热传导效率，因此也被称为“快速”管或板。

　　第三步， 对于PCR板的选择，需要进一步根据实验类型和仪器选择裙边、切割角、颜色等。

　　3.1裙边： 根据仪器加热模块类型选择

　　无裙边:

　　兼容绝大多数PCR仪和实时PCR仪的模块，易于剪裁，但不适用于自动化应用。

　　半裙边：

　　板的边缘周围具有短的边缘，加热或移液过程中提供足够的支撑，不宜变形弯曲

　　全裙边：

　　有覆盖板高度的边缘，适用于自动化操作

　　3.2颜色： 透明或白色

　　PCR板通常提供透明、磨砂或白色不同的颜色形式，以适用于不同类型PCR反应。在实时PCR的反应时，与透明耗材相比，我们更推荐使用白色塑料耗材，以实现灵敏和准确的荧光检测。

　　白色耗材通过阻止荧光折射出管来提高qPCR数据的灵敏度和一致性。折射被最小化时，更多的信号被反射回检测器，从而增加信噪比(图B)。此外，白色管壁可阻止荧光信号传递至PCR仪模块，避免被吸收或不一致地反射荧光信号，从而使重复实验中的差异降至低。在极少数情况下，如果荧光探测器由于白色孔的信号反射增强而过饱和，可以使用磨砂孔替代。

　　3.4 切角

　　切角是对PCR板的一个角缺失，取决于所需要适配的仪器。切角可能位于96孔板的H1，H12或A12位置，或384孔板的A24位置

　　3.5品牌选择

　　市场上有许多品牌和厂家提供PCR耗材，选择时需要考虑哪些因素呢? PCR耗材品质由包括原料、无污染、一致性等决定。

　　1. 原料：Thermo Scientific选用优质的全新医用级聚丙烯原料

　　2. 生产环节：十万级洁净车间生产，无RNase、DNase和外源DNA污染

　　3. 批间一致性：遵循严格的生产标准和检测标准，由资深专家使用的设备进行生产，确

　　保批间一致性和可追溯性，确保用户获得可靠PCR实验数据。

　　第四步，选择正确的PCR膜

　　PCR板选好后，还需要选择一张好的PCR膜来密封，才能保证获得准确可靠的PCR数据，这对实时PCR尤其重要!

　　我们的Thermo Scientific™ Absolute™ qPCR粘性封口膜(货号AB1170)产品采用压力敏感密封设计。只有在施加压力的情况下，这种非粘性粘合产品才可以粘合到孔的边缘上。其只在需要粘合的位置产生良好的密封效果，使孔开口位置变得超透明，实现的荧光信号传输。

　　强效压敏粘附，可产生牢固的粘合效果，以尽量减少蒸发，使每个样本保持较高的PCR效率

　　其光学透明度可用于qPCR及其他荧光应用

　　一致的封口厚度和透明度，确保整块板信号传输相等

　　可剥离，剥离后平板上无粘性残留

　　膜两端无粘性，轻松进行密封和去除操作

　　适用温度范围：–80°C至110°C

　　PCR耗材 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。