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(A005-96T 酶标板法)
试剂一:ABTS试剂300μL × 1支
试剂二:液体试剂300μL × 1支
试剂三:1mM Trolox标准溶液 1ml×1支(乙醇配制)
试剂盒-20℃可保存6个月。
ABTS应用液:将试剂二小心全部转入试剂一管内,旋好管盖,摇匀,室温放置12-16h,得到ABTS浓缩液。取10μLABTS浓缩液,采用稀释液(稀释液先采用纯水20×稀释)稀释至734nm处吸光度为0.65-0.75,记下稀释倍数(通常稀释倍数为50-200倍,可先从80-100倍区间内开始尝试。)将剩余浓缩液按稀释倍数稀释,得到ABTS应用液,避光存放。
Trolox标准溶液:如您需要将样品的ABTS自由基清除能力表示为Trolox当量(TEAC),则需要同步测定Trolox的ABTS清除能力;如您仅需要将结果表示为ABTS自由基清除率,则您可以忽略此步骤(可以不需要用到试剂三)。
| 空白孔 | 测定孔 | 对照孔1 |
ABTS应用液(μL) | 200 | 200 |
|
样品溶液(μL) |
| 20 | 20 |
稀释液(μL)2 | 20 |
| 200 |
充分混匀,室温避光静置30min3使之充分反应。734nm处采用酶标仪测定吸光值。
1如样品颜色较浅可不做对照管(即认为对照为0);
2稀释液即您配制样品的溶剂,一般为水、乙醇、PBS等;
2建议反应30min,数值更为准确,但一般快速测定时,反应10min即可(参考文献:)。
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1. 简单计算清除率
2. 将清除率表示为Trolox当量(Trolox Equivalent Antioxidant Capacity, TEAC)
先根据计算方法1求出不同浓度Trolox的ABTS自由基清除能力,并作出标准曲线(如下图),再根据计算方法1求出样品的ABTS自由基清除能力,根据标准曲线求出TEAC。
注:1 如未做对照孔,可以将其视作为0;
2 质控孔求值时将其视作测定孔进行计算即可。
1. 如样品中色素物质不是分析对象,建议先进行脱色处理,处理后样品可不做对照孔;
2. 如不确定样品的ABTS自由基清除能力,可先做不同浓度的稀释液进行摸索,并选择适宜浓度进行测定,高浓度下,浓度与清除率间并不线性相关。Trolox标准曲线绘制建议选取100-1000μM的浓度进行分析;
3. 混匀很重要,建议加样时反复吹打,加样结束后剧烈振摇酶标板30秒以上(液体不能溅出来)。
相关试剂盒:
1. 氮自由基(DPPH)清除能力测试试剂盒(分光光度计法和酶标板法)
2. 超氧阴离子自由基清除能力测试试剂盒 (分光光度计法和酶标板法)
3. 铁离子还原能力测试试剂盒 (分光光度计法和酶标板法)
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7. ABTS自由基清除能力测试试剂盒(酶标板法)
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