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普及工具

蛋白质泛素化是一种控制蛋白质的调节机制：蛋白质相互作用、蛋白质降解和空间定位，由链特异性多泛素化和/或单泛素化介导。Signal Seeker™泛素化工具具有捕获任何靶蛋白的单泛素化和多泛素化的独能力。

使用我们全面的泛素化检测试剂盒轻松研究靶蛋白泛素化：无需质谱

广谱泛素化亲和珠富集单泛素化和多泛素化

泛泛素抗体检测广泛的泛素化蛋白，包括K48、K63和M1多泛素链

Signal Seeker™泛素检测试剂盒（10次测定）

信号导引头泛素化检测试剂盒（10次测定，免疫沉淀格式）

Signal Seeker™生产线的开发允许专家和非专家对关键的调节蛋白修饰进行简单分析。全面的Signal Seeker™试剂盒提供了一个亲和珠系统，用于从任何给定的细胞或组织裂解物中分离和富集修饰蛋白。然后使用靶蛋白的一级抗体通过标准的蛋白质印迹程序分析富集的蛋白质群体

产品用途包括

调查瞬态调节机制

测量多途径成员蛋白的信号事件

发现感兴趣的蛋白质的新修饰

深入了解监管机制

测量内源性或瞬时表达的蛋白质信号事件

试剂盒内容

泛素试剂盒包含以下成分：

裂解和蛋白质定量步骤IP和预澄清步骤洗涤步骤洗脱步骤西方步骤

BlastR™裂解缓冲液

BlastR™稀释缓冲液

BlastR™过滤器

蛋白酶抑制剂鸡尾酒

去泛素酶抑制剂Cocktail

Precision Red™蛋白质测定试剂

泛素亲和珠

泛素控制珠

BlastR™冲洗缓冲液

旋转柱

珠子洗脱缓冲液

化学发光试剂A

化学发光试剂B

抗泛素HRP抗体

示例结果

这些试剂盒有许多应用（见下一节），我们在这里描述Rac1蛋白的一个有趣应用：

应用1：调查高度瞬态调节事件

已知包括Rac1在内的Rho蛋白家族的活性部分通过泛素化（也称为泛素化）事件来调节，泛素化事件可通过修饰蛋白的降解和/或定位导致信号通路调节（Visvikis，O.等人，2010）。生物细胞102:377-389。Nethe，M.和Hordijik，P.2010。细胞科学杂志。123: 4011-4018). 在许多情况下，Rac1的GTP结合活性形式是泛素化的优选底物。例如，已经表明用细菌毒素CNF1处理的细胞导致Rac1的组成型激活以及随后的单泛素化和多泛素化（Pop，M.等人，2004。J.生物学。化学。279: 35840-35848).

使用Signal Seeker™泛素化检测试剂盒（Cat#BK161），我们检测了用CNF1毒素（Cat#CN04）处理的3T3细胞中内源性Rac1的泛素化，发现从300μg 3T3细胞裂解物中可以检测到Rac1的单泛素化和多泛素化。该试剂盒提供了一个用户友好的工具来检查任何靶蛋白的单泛素化和多泛素化。

图1:Swiss 3T3细胞用MG-132预处理，然后未处理或用CNF1（CN04）处理3小时，然后用BlastR缓冲液裂解。BK161试剂盒用于在每种条件下对300μg裂解物进行IP。泳道1：3μg输入未处理的裂解物，泳道2：泛素亲和珠（UBA01）加未处理的溶胞产物，泳道3：UBA01加CN04处理的裂解产物，泳路4：泛素对照珠（CUB02）加未经处理的裂解液，泳道5：CUB02加CN04处理的裂解产物。使用抗Rac1抗体分析样品的Rac1泛素化。

在这一研究领域可以尝试的其他实验包括：

•参与Rac1单泛素化和多泛素化的泛素酶或去泛素酶的药理学研究

•研究在各种不同生长因子或药物治疗下Rac1激活和泛素化之间的关系。

•检查泛素化Rac1与效应物的相互作用。

•检查泛素化Rac1和Rac1的其他调节性PTM之间的串扰。

欲了解更多信息，请联系： cytoskeleton

关联产品：

Signal Seeker™磷酸氨酸检测试剂盒（目录号BK160）

Signal Seeker™SUMOylation 2/3检测套件（类别号BK162）

Signal Seeker™：BlastR™快速裂解物制备试剂盒（目录号BLR01）

Signal Seeker™泛素亲和珠（类别号UBA01B珠）

Signal Seeker™：PTMtrue™泛素抗体（目录号AUB01）

Signal Seeker™乙酰赖氨酸检测试剂盒（30份测定）

信号导引头乙酰化检测试剂盒（30次测定，免疫沉淀形式）

Signal Seeker™生产线的开发允许专家和非专家对关键的调节蛋白修饰进行简单分析。全面的Signal Seeker™试剂盒提供了一个亲和珠系统，用于从任何给定的细胞或组织裂解物中分离和富集修饰蛋白。然后使用靶蛋白的一级抗体通过标准的蛋白质印迹程序分析富集的蛋白质群体。

产品用途包括

调查瞬态调节机制

测量多途径成员蛋白的信号事件

发现感兴趣的蛋白质的新修饰

深入了解监管机制

测量内源性或瞬时表达的蛋白质信号事件

验证数据：乙酰赖氨酸检测试剂盒皮书

这些套件有许多应用程序，这里我们描述一个有趣的例子：

应用1：使用AAC02珠、AAC03珠或组合珠（AAC04珠）进行总乙酰赖氨酸图谱的免疫沉淀检测——使用BK163试剂盒时，所有3种选择都是可能的

使用AAC02珠、AAC03珠和AAC04珠（50µl珠浆）对用脱乙酰酶抑制剂[TSA（1µM）和烟胺（1mM）]处理（+）或未处理（-）的Cos-7细胞的乙酰化蛋白进行IP处理6小时。用AAC03-HRP抗体（1:3000）洗脱并通过蛋白质印迹分析富集的乙酰化蛋白的总图谱。使用小鼠IgG珠作为非特异性结合的对照（Cat#CIG02）。每个IP测定使用1 mg Cos-7裂解物。

应用2：使用AAC02珠粒、AAC03珠粒或组合珠粒（AAC04珠粒）免疫沉淀靶特异性乙酰化蛋白——使用BK163试剂盒时，所有3种选择都是可能的

AAC03珠粒和AAC02珠粒（50µl珠浆）和1:1混合物（各25µl）AAC04珠粒用于脱乙酰酶抑制剂[TSA（1µM）和烟胺（1mM）]处理（+）或未处理（-）的Cos-7细胞的乙酰化蛋白IP 6小时。使用抗EGFR和抗RhoGDI抗体进行蛋白质印迹分析，并使用LiCor-Empiria软件对信号进行定量。还进行IP测定，并对小鼠IgG对照珠的信号进行定量（印迹未显示）。每个IP使用1 mg裂解物。

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