骨切片详细介绍
时间：2023-05-11 阅读：1839
通用名称：骨切片
用于传统染色法和培养基ELISA（CrossLaps）骨破坏重吸收的体外精确检测
骨是一种很有活力的组织，在人的一生中都在不断地重建。现已证实，在骨中存在一些特殊物质，能够影响到破骨细胞的活性。因此在北欧生物科技公司，我们使用高质骨而不是牙质应用于研究。现在将向我们的客户提供此类服务。
每批骨切片通过重吸收检测法来测试其质量。在该检测中，由骨切片上产生凹点证明破骨能力。随后用培养基酶免吸附试剂盒Crosslaps 检测上清液。只有当两项测试都呈阳性时，该骨切片才能用于进一步的重吸收检测。
破骨细胞产生凹点的活性通过人破骨重吸收方法检测。对破骨重吸收的定量分析可以采用传统的对凹点染色方法，亦可使用培养基酶免吸附检测法Crosslaps，两者关系见图 1 与 2。由于破骨细胞实验往往需要较大量的蛋白质，而从牛骨切片中提取的蛋白质用于 96 孔板，公司开发了能够适用于 6，12，24，48 孔板的骨皮质切片。如图 3 所示。
将人破骨细胞分散覆盖于牛骨皮质片上，然后加入不同浓度的抗重吸收剂（A: 90 µM, B: 30 µM, C: 10µM, D: 0 µM）。第6 天取等量细胞培养上清液用于检测胶原c 端交联肽（ctx）的量（培养基 ELISA-CrossLaps）
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从骨片上转移破骨细胞并且用阻凝蛋白苏木精染色，形成可见的凹点（图 1）
这种 6 孔板大骨片（GBS）来提取破骨细胞蛋白，这些破骨细胞在骨上而非塑料上培养，对蛋白质的表达是有影响的（数据未列出）。要进行破骨细胞的基因描述实验时，我们推荐使用这些底物提取 RNA。从骨切片分离 RNA 的方案和人破骨细胞的培养方案可根据要求制定
【来源】
骨切片由牛股骨的皮质部分制成，适合 96 孔板，直径 6mm，大概 200µm 厚。
【储存】
骨切片保存于 4°C 下 70%乙醇中。为了保持骨切片的质量，应缩短使用周期和避免室温下放置。
【处理】
我们推荐在转移至 96 孔板之前，先将骨切片置于含培养基的 10%血清中清洗三次。
【培养】
重吸收实验一般持续 72 小时（见图 2）。然而在加入试剂到破骨细胞培养液中 16 或 24 小时后，就可观察到细微的变化了，甚至 8 小时后即可用相应方法观察到。
【特征】
与凹点染色和划线不同，培养基酶免吸附法Crosslaps 不要求破骨细胞培养的终止。因此，可以从相同的股切片中获得几个样品，从而使互换性检测特定物质影响下的破骨细胞活性成为可能。材料的处置与常见细胞培养物的处置相同。
【参考文献】
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