用荧光叠氮化物探针通过CuAAC可视化炔烃标记的生物分子的一个主要缺点反应是需要去除未反应的荧光探针。当对细胞内环境、活体组织成像或对体内生物分子进行可视化时，这尤其成问题。去除所有未反应的荧光探针的困难也是背景信号和非特异性结合的主要原因之一。

为了克服这一缺点，Carolyn Bertozzi小组设计了荧光叠氮化物探针，通过铜催化或无金属点击化学。这些叠氮化物探针在与炔烃反应之前不具有荧光性。已终止在CalFluor中，这些探针具有从绿色到远红色波长的发射最大值，并且能够实现灵敏无洗涤条件下的生物分子检测。许多报告表明，CalFluor探针是用于敏感可视化细胞中代谢标记分子（聚糖、DNA、RNA和蛋白质）的工具，正在开发在不洗涤的条件下将动物脑组织切片、斑马鱼和小鼠脑组织切片。