1.封闭将封闭溶液添加至样品中。去除封闭溶液。

2.一抗将一抗在适当的缓冲液中稀释，并添加至样品中。在合适的缓冲液清洗几次，

3.将两份PLA探针，以1：5的比例在适当的缓冲液中稀释，并添加至样品中。

4.在H2O中以1：5的比例稀释连接储液。在该溶液中以1:40比例稀释连接酶并将混合物添加至样品中。

5.在H2O中以1：5的比例稀释扩增储液。在该溶液中以1:80比例稀释聚合酶并将混合物添加至样品中。

6.成像准备使用含有DAPI的Duolink原位封固剂加载样品，等待约一刻钟，然后在荧光或共聚焦显微镜下进行分析。