ozbiosciences脂转染技术是如何工作的?
时间:2024-01-05 阅读:411
脂转染是一种基于脂质的转染该技术属于生化方法,还包括聚合物、DEAE葡聚糖和磷酸钙。
脂转染原理是将核酸与阳离子脂质制剂结合起来。由此产生的分子复合物(称为脂质复合物)随后被细胞吸收。
脂转染的主要优点是效率高、能够在多种细胞类型中转染所有类型的核酸、易于使用、重现性好和低毒性。此外,该方法适用于所有转染应用(瞬时转染、稳定转染、共转染、反向转染、顺序转染或多重转染……)、高通量筛选测定,并且在一些体内模型中也显示出良好的效率。
它是如何工作的?
用于脂转染的脂质试剂通常由合成的阳离子脂质组成,这些脂质通常与辅助脂质(例如 DOPE(1,2-二油酰磷脂酰乙醇胺)或胆固醇)混合。这些脂质混合物在生理 pH 值下组装在脂质体或胶束中,总体带正电荷,并能够通过静电相互作用与带负电荷的核酸形成复合物(脂质复合物)。基于脂质的转染试剂与核酸的结合导致核酸的紧密压缩和保护,并且这些阳离子复合物主要通过内吞作用内化。
一旦进入细胞,就会有两种导致核酸释放到细胞质中的机制。一种依赖于聚阳离子残基的内体缓冲能力(称为“质子海绵效应”)。另一种描述了细胞带负电荷的脂质中和转染试剂的阳离子残基导致内体膜不稳定的能力。
最后,导致 DNA 核摄取(siRNA 不需要)以及随后基因表达的细胞和分子事件仍然具有高度推测性。然而,细胞分裂对转染效率的重要性支持这样的假设:有丝分裂过程中核膜破坏促进 DNA 核摄取。尽管如此,原代细胞(非分裂)和体内的转染也可以通过脂转染来实现,这证明DNA可以进入发生基因表达的细胞核。