交联剂包含至少两个反应性基团，它们对包括巯基和胺在内的许多基团具有反应性，并在两个或多个分子之间产生化学共价键。可用交联剂靶向的官能团是伯胺、羧基、巯基、碳水化合物和羧酸。蛋白质分子具有许多这样的官能团，因此蛋白质和肽可以使用交联剂容易地结合。交联剂用于研究蛋白质结构和功能，将蛋白质锚定在固体支持物上，制备免疫原、免疫毒素和其他结合的蛋白质试剂。
交联剂可以根据反应性基团的数量和相似性分成几组:
• 同双功能具有两个相同的反应端。
• 异双功能具有两个不同的反应端。
同双官能交联剂用于一步反应，而异双官能交联剂用于两步连续反应，其中最不稳定的反应末端首先反应。同双官能交联剂具有导致自结合、聚合和细胞内交联的趋势。另一方面，异双官能试剂允许更可控的两步反应，这使得不希望的分子内交叉反应和聚合反应最小化。
广泛使用的异双功能交联剂用于通过胺和巯基偶联蛋白质。最不稳定的胺反应性NHS-酯首先偶联，在除去未偶联的试剂后，继续偶联巯基。巯基反应基团通常是马来酰亚胺、吡啶基二硫化物和α-卤代乙酰基。其他交联剂包括碳二亚胺，它连接羧基(-COOH)和伯胺(-NH2)。存在具有一个光反应性末端的异双官能交联剂。光反应性基团在没有特定基团可与之反应时使用，因为光反应性基团在暴露于紫外光时会发生非特异性反应。
通常希望最小化由于交联反应引起的结构变化的程度，如果蛋白质分子具有生物活性则更是如此。因此，交联是在温和的缓冲液和pH条件下进行的。根据应用，结合程度也很重要，并且必须保持最佳的交联剂与蛋白质的比例。蛋白质外表面上目标基团的数量也很重要。如果暴露的目标基团易于结合；可以使用较低的交联剂与蛋白质的比率。
交联剂具有不同的间隔臂长度。当两个目标基团相距较远时，可以使用具有较长间隔臂的交联剂。具有不同间隔臂的交联剂的可用性使得交叉反应效率更优化。具有短间隔臂的交联剂适用于分子内交联。可切割的交联剂也是可用的，这扩展了蛋白质分析的范围。
蛋白质交联剂的选择
当选择交联剂时，要考虑以下特征:
1.试剂溶解度
2.反应基团的性质
3.同双功能或异双功能
4.光反应性或热反应性基团
5.间隔臂的长度
6.共轭产物可裂解与否
7.进一步标记的可能性
8.结合所需的反应条件
Double Do交联剂
G-Biosciences提供多种交联剂作为Double Do交联剂。Double Do交联剂系列产品包括化学交联剂、由特定反应缓冲液组成的支持附件、完整的反应系统、选择指南和方案。
为了选择交联剂，需要考虑几个因素:
• 反应方向:确定要交联的目标残基，选择不干扰蛋白质功能的试剂。
• 膜渗透性:对于细胞表面标记，选择非膜渗透性试剂。
• 劈得开的:便于从固体支持物上释放交联蛋白或用于进一步的下游应用。
• 可逆的:可裂解试剂的替代物是可逆试剂。例如，ANB-NOS是通过光解作用释放的。
• 空间阻碍:结合位点周围的大基团可能需要具有更长间隔臂的试剂。
