垂直流动免疫测定依赖于与更常见的相同的基本原理横向流动免疫分析做了一些修改的格式。这两种方法之间的区别是流体的垂直和横向流动。然而，与传统的横向流动分析相比，垂直流动技术有几个优点，最重要的是减少了分析时间(< 5分钟)，见表1

垂直流动免疫测定可用于快速检测感兴趣样品中的抗原。样品可来自广泛的应用领域，如临床、兽医、农业、食品、生物防御和环境行业。即使在复杂的样品基质中，检测灵敏度通常也在较低的纳克/毫升范围内。

表一。与横向流动和其他快速流动类型测试相比，快速垂直流动技术的特点和优势。

垂直流动分析是如何工作的

与横向流动一样，垂直流动免疫测定依赖于将捕获抗体固定在试剂垫上，将感兴趣的样品(有或没有待检测的抗原)施加到该试剂垫上。结合抗原的检测随后通过抗原特异性抗体金缀合物的结合来实现。该步骤完成了由捕获抗体、抗原和最终的金缀合物组成的夹心，并产生直接和长期的视觉可检测的红色点，指示抗原的存在，图1。

令人感兴趣的是，通过使用不同类型的纳米颗粒缀合探针进行检测，可以容易地实现检测的替代颜色。一个例子是抗体偶联的金纳米海胆，其在检测中阳性检测时将产生蓝色点。

图一。分析样品中存在(A，B)和不存在(C)目标物时，使用金结合物(A)或金纳米海胆结合物(B)后Miriad垂直流分析柱的外观图示。

垂直流式免疫分析中的多路复用能力

垂直流动技术也允许容易的多路复用。在Cytodiagnostics Inc .销售的Miriad垂直流检测试剂盒中，可以在5分钟或更短时间内同时评估单个样品中4种目标的存在。

通过在膜上预定的位置和/或模式点样针对不同抗原的捕获抗体，可以容易地实现多重化。为了更容易观察，这种多重化也可以与不同颜色的纳米颗粒探针结合，例如使用分别具有红色和蓝色检测颜色的金缀合物和金纳米海胆缀合物。

图二。垂直流动免疫测定中的多重检测。左图显示了3个抗原中的2个(红点)和对照的阳性检测。右图显示了使用两种不同颜色的纳米颗粒探针(红色:金纳米颗粒，蓝色:金纳米颗粒)对两种不同抗原的阳性检测。