本快速指南提供了 Covaris 8 AFA-TUBE TPX 条 (PN 520292) 和 96 AFA-TUBE TPX 板 (PN 520291) 消耗品的细胞裂解和蛋白质提取方案，使用三种 Covaris 聚焦超声仪仪器：ML230、LE220-plus 和LE220Rsc。

本快速指南中提到的值为标称值。公差如下：

 • 温度：± 3 °C 

• 样品体积： - 8 AFA-TUBE TPX 试纸条：± 2.5 µl - 96 AFA-TUBE TPX 板：± 2.5 µl 

• 水位：± 1 mm

样品指南

 • 输入：适用于 8 个 AFA-TUBE TPX 条和 96 个 AFA-TUBE TPX 板 

• 福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 卷轴 - 最大 10 µm x ~ 500 mm² 

• < 5 mg 新鲜冷冻组织 

• 哺乳动物细胞 ( 1,000 至 100,000)

 • 缓冲液：组织裂解缓冲液 (TLB) (PN 520284) 

• 警告：请勿使用 AFA-TUBE TPX 条或板进行长期样品储存。样品应在处理后转移。

仪器设置 • 请参阅特定仪器手册以了解完整设置。 

• AFA-TUBE TPX 条和板具有与每种仪器相关的特定机架。

FFPE 卷轴实验方案 使用组织裂解缓冲液处理 FFPE 卷轴的说明。

 • 在每个测试孔中加载约10 µm x 约500 mm² FFPE 卷轴。 

• TLB 的建议体积为 100 µl，但可根据卷轴尺寸在 75 至 150 µl 之间更改。在每个测试孔中加载 100 µl 组织裂解缓冲液。确保卷轴全浸没在组织裂解缓冲液中。

 • 脱蜡： - 使用下面 AFA 设置表中描述的“乳化”AFA 条件处理测试孔。 

• 解交联： - 将AFA-TUBE TPX 板或条放入设定为90 °C 的热循环仪中90 分钟。 

• 均质化： - 使用下页 AFA 设置表中描述的“均质化”AFA 条件处理测试孔。此时可以分析蛋白质提取。将 AFA-TUBE TPX 耗材以 3,000 x g 离心 5 分钟（平板）或 5000 x g 离心 5 分钟（条带）。除去上清液并将其用于定量（BCA 测定）和/或定性分析（SDS-PAGE）。请参阅附录 A：蛋白质提取验证了解更多信息。

组织裂解方案 使用组织裂解缓冲液处理组织的说明。 • 将最多5 mg 的组织装入每个测试孔中。 • 在每个测试孔中加载75 µl 组织裂解缓冲液。确保组织全浸没在组织裂解缓冲液中。 • 均质化： - 使用下页 AFA 设置表中描述的“均质化”AFA 条件处理测试孔。此时可以分析蛋白质提取。将 AFA-TUBE TPX 耗材以 3,000 x g 离心 5 分钟（平板）或 5000 x g 离心 5 分钟（条带）。除去上清液并将其用于定量（BCA 测定）和/或定性分析（SDS-PAGE）。

细胞裂解方案 使用组织裂解缓冲液处理细胞的说明。 • 将最多105 个细胞装入每个测试孔中。 • 在每个测试孔中加载40 µl 组织裂解缓冲液。 • 均质化： - 使用下页 AFA 设置表中描述的“均质化”AFA 条件处理测试孔。此时可以分析蛋白质提取。将 AFA-TUBE TPX 耗材以 3,000 x g 离心 5 分钟（平板）或 5000 x g 离心 5 分钟（条带）。除去上清液并将其用于定量（BCA 测定）和/或定性分析（SDS-PAGE）。

附录 A：蛋白质提取验证 可以按照这些方案进行过程验证。

使用 Covaris 缓冲液的蛋白质提取工作流程的定量性能可以使用 BCA 测定（Pierce™ BCA 蛋白质测定试剂盒，来自 ThermoFisher Scientific 的 PN 23227）进行测试。建议在进行 BCA 测定之前用去离子水将溶液按 1:5 稀释。此外，BCA 检测标准品的不同稀释度应使用相同的稀释剂（使用去离子水按 1:5 稀释的 TLB 缓冲液）进行。可以使用 SDS-PAGE（4-20% Criterion TGX Stain-Free Protein Gel，来自 Bio-Rad 的 PN 5678093）测试定性性能。根据要求共享对照样品的定量和定性数据。