laebio：Human Topoisomerase I Drug Screen Kit 货号：K003

描述:
该检测试剂盒包含用于药物筛选目的的I型拓扑异构酶活性常规检测的试剂。人拓扑异构酶I (topoI)是喜树碱和其他“拓扑异构酶I毒物”的细胞内靶标，其中一些是迄今为止鉴定的很有希望的抗癌药物。Topo I药物筛选试剂盒具有巨大的价值，因为它将能够合理筛选新的抗癌化合物，有朝一日可能用于减轻被诊断患有癌症的人的痛苦。包括DNA标记以允许清楚地检测酶。该检测对拓扑异构酶I具有特异性。强烈建议将活性人拓扑异构酶I(目录号P005)与该试剂盒一起使用。

应用:

• 体外研究超螺旋对转录的影响。
• 体外研究染色质重建。
• 确定自然发生的DNA的超螺旋程度。
• 检测长度仅相差一个碱基对的突变质粒。
• 通过解螺旋DNA以暴露限制性位点来增加抗性DNA底物的限制性内切酶消化。
• 抗癌药筛选。

质量控制测试:

1. 通过分析线性KDNA和线性质粒DNA的形成来进行核酸酶污染的测试。用KDNA或超螺旋pGEM 5Z DNA孵育(4 hrs. at 37^oC in the presence of 10 mM MgCl₂)被执行。在这些条件下不会产生线性DNA或分解产物。
2. Topo II交叉污染检查为阴性。在topo II反应条件下，KDNA不能脱去。

套件内容:

• 超螺旋质粒底物DNA对照(目录号D001，

  100微升

  LAE1DNA，0.2微克/微升，适用于100次标准检测)。
• 松弛的质粒DNA标记物(cat# D002，100 ul预松弛的pLAE1 DNA，由Topo I以0.04 ug/ul的浓度在凝胶加载缓冲液中制备，适用于20种标准分析)。
• 5X Topo I反应缓冲液(目录号B001，500微升，适用于100种标准检测)。
• Topo I停止缓冲液/凝胶加载染料(目录号B002，500微升，适用于100种标准检测)。
• 对照抑制剂(目录# B003，喜树碱；冻干)。

检测条件:

• 建议在最终体积为10微升的Topo I反应缓冲液(40 mM Tris-Cl，pH 7.5，100 mM NaCl或KCl，10mM MgCl)中使用5单位的Topo I活性物质(目录号P005)进行松弛试验

  ₂

  、0.5 mM EDTA、30微克/毫升BSA)。
• 标准分析:超螺旋质粒DNA(目录号D001)以0.2微克/反应使用。用5微升(在10微升反应体积中)终止缓冲液(5% sarkosyl，0.0025%溴酚蓝，25%甘油)终止反应。然后可以在0.8%天然琼脂糖凝胶上分析反应产物。
• 每个泳道加载5 ul (0.2 ug)松弛的质粒DNA标记(目录号D002)作为对照。

运输/储存:
该套件在环境温度下运输，应在-20℃下储存^oC.

仅供研究使用。

一个单位的topo I与0.2微克pGEM 5Z DNA在37℃孵育30分钟^oC.

上海牧荣生物科技有限公司

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laebio：Human Topoisomerase I Drug Screen Kit 货号：K003