新的色谱柱柱活化冲洗技巧

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新的色谱柱柱活化冲洗技巧

方法/步骤

一、新的色谱柱活化：采用100%甲醇1ml/min冲洗60min，再换成流动相进行平衡；如果流动相中含有缓冲盐，在换成流动相前，请使用过渡流动相过渡后再换流动相平衡；

二、日常维护

1、建议检测前样品和流动相进行过滤；

2、建议每天做完样品后及时进行清洗；

3、常规检测

测试完后，直接把色谱柱反向连接采用90%有机相冲洗45min，最后保存在纯甲醇或纯乙腈中；

4、使用缓冲盐条件：

1）等度条件：使用缓冲盐之前和之后都用过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min；

2）梯度条件：使用缓冲盐之前与初始流动相组成相同的过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min；

注意：过渡流动相是指有机相和水相比例与分析流动相相同比例，只是不含有缓冲盐；

3）缓冲盐冲洗干净后，采用90%有机相反向冲洗60min，最后保存在纯有机溶剂中；

注意：如果使用缓冲液不能存留色谱柱中过夜；

三、色谱柱的保存

1. 短时间内色谱柱的保存

  如果使用时间间隔不超过四天，则色谱柱无需特别的维护，只需根据最后一次测试使用的流动相或样品的性质，在使用后用纯甲醇、纯水或甲醇与水的混合溶液进行淋洗，直至基线走平约半小时即可。

 2. 长时间色谱柱的保存

如色谱柱长时间不用，则最好将其从HPLC仪中取下保存，取下前用合适的溶剂淋洗，洗去不适与保存色谱柱的洗脱液，如C18反相柱可以用纯甲醇或乙腈作为保存的介质，然后用塑料塞头将其塞紧，以免色谱柱内*干燥。

END

注意事项

色谱柱使用pH范围在1.5～10.0，通常建议使用范围pH为2.0～8.0比较合适，流动相超出pH范围将会导 致硅胶基质流失和键合相断裂使柱效下降，使用寿命变短，所以要严格控制pH范围

                                                                                                                                           本篇转载至实验之家