茁彩生物|柠檬酸(CA)检测
时间:2023-06-26 阅读:632
柠檬酸(Citric Acid, CA),又称枸橼酸,是一种重要的有机酸,在自然界中分布很广,天然的柠檬酸存在于植物如柠檬、柑橘、菠萝等果实和动物的骨骼、肌肉、血液中。很多种水果和蔬菜,尤其是柑橘属的水果中都含有较多的柠檬酸,特别是柠檬和青柠含有大量柠檬酸。
目前,可采用分光光度法检测柠檬酸(CA)的含量。
分光光度法是基于物质对光的吸收特性进行的。当光线穿过物质时,会被物质吸收,且吸收程度与物质的浓度成正比。因此,通过测量光线通过物质时的吸光度,可以确定物质的浓度。在 CA 含量检测中,常用的分光光度法包括比色法、吸光光度法等。
一、样品中柠檬酸提取:
a. 液体样品中柠檬酸提取:取 0.1mL 液体加试剂一 0.9mL,充分混匀,11000g/min 4℃离心 10min, 取上清液,待测。
b. 组织中柠檬酸提取:称约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一,冰上充分研磨,11000g/min 4℃离心 10min,取上清液,待测。
c. 线粒体中柠檬酸提取:称约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一,冰上充分研磨,600g/min,4℃离心5min;取上清至另一 EP 管中,11000g/min,4℃离心 10min,弃上清(此上清液可用于细胞质CA 含量测定);向沉淀中加试剂二 200µL,以及试剂三 2µL,充分悬浮溶解,11000g/min,4℃离心 10min,取上清液,待测。
二、测定:
1. 分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 545 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂一置于 30℃水浴中预热 30min 以上。
3. 按下图在 1.5mLEP 管中加入相应试剂
试剂名称(µL) | 空白管 | 测定管 | 标准管 |
蒸馏水 | 100 | ||
上清液 | 100 | ||
标准品 | 100 | ||
试剂一 | 700 | ||
试剂四 | 100 | ||
试剂五 | 100 | ||
充分混匀后室温静置 30min,于 545nm 测定吸光度,记为 A 空白管、A 测定管、A 标准管。 |