细胞衰老检测——β-半乳糖苷酶染色
时间:2024-04-01 阅读:420
β-半乳糖苷酶属于糖苷水解酶,存在多种微生物来源,除了水解活性,某些来源的 β-半乳糖苷酶也具有转糖基活性。β-半乳糖苷酶不仅在食品工业中的用途越来越广泛,在生物技术领域如基因工程、酶工程、蛋白质工程等方面也都发挥着重要作用,并开始广泛应用于医药等领域。
实验原理:
β-半乳糖苷酶染色试剂盒是一种基于衰老时衰老相关半乳糖甘酶活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。在普通光学显微镜下就可以观察到细胞或组织的衰老情况。细胞衰老被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式,同时也是生物体老化的一种潜在原因。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒以X-Gal为底物,在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物,光学显微镜下可观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。试剂盒仅染色衰老细胞,对正常培养的衰老前的细胞、静止期细胞、永生细胞或肿瘤细胞等不会染色。
注意事项:
1. β-Gal固定液有一定的腐蚀性和毒性,操作时请注意防护。
2. β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH条件,不能在二氧化碳培养箱中进行染色反应。较高浓度的二氧化碳会影响染色工作液的pH值,从而导致染色失败。
3. 加入染色液后,可以用封板膜或者保鲜膜封住培养板防止蒸发。