Thp-1细胞高效率转染条件分享

一、转染材料准备

1. 转染试剂用量：10ul

2. siRNA浓度：20um/L

3. 细胞密度：1*106-1*105

4. 转染用培养板：6孔板

5. 转染试剂：Advanced DNA RNA转染试剂；货号：AD600025

6. 转染时间：48小时

7. 细胞培养胎牛血清：Z7180FBS-500超低内毒素胎牛血清

8. 细胞冻存液：L0100无血清细胞冻存液

注意：本细胞转染用量条件不适合lipo使用。

操作过程：

   1.提前1天_{接种细胞：细胞汇合度在60-80%左右，再进行转染。}

2. 核酸复合物制备：将核酸与转染试剂按照比例关系直接混合，用移液器吹打、混匀，室温静止15分钟。

3.在细胞培养基中加入核酸复合物：根据参考用量在细胞中加入核酸复合物，并轻轻混匀；细胞培养基里面可以含有血清。

4.细胞换液：转染24小时后对细胞进行正常换液，悬浮细胞转染过程中不用换液。

5.分析结果：质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率，48-96小时检测mRNA或蛋白表达。若进行稳定表达细胞株的筛选，则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA转染后9小时荧光检测转染效率，48-72小时检测mRNA或蛋白表达。

二、转染试剂产品介绍

Zeta Life 公司与美国加利福尼亚大学旧金山校区联合开发用于哺乳动物细胞、活体动物转染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子转染试剂，此技术成为新的全球蛋白功能、免疫细胞及干细胞治疗、研发及生产的主要关键技术之一。

三、优秀表现

Zeta Life多肽小分子转染试剂尺寸大小是传统脂质体转染试剂体积的1/10;

本转染试剂是通过细胞内㖔和细胞主动吸收进入细胞；

本转染试剂进入后对细胞膜无物理性损伤，不易出现细胞变形，保持高的细胞活力；

不激活细胞表面或细胞体内marker;

可反映真实的细胞通路蛋白原始数据；

可转染免疫细胞、悬浮细胞等；