体外哺乳动物细胞染色体畸变试验常见问题与解答

—热点问题—

第一题    一张玻片可观察到200个中期分裂相吗？如果不够，该如何处理？

大多数情况下，一张玻片很难找到200个可用于分析的中期分裂相，建议同一个剂量组多制作一些玻片，本公司一个剂量组通常会制作至少4张玻片，以保证足够中期分裂相细胞可供分析。

第二题    如何辨别细胞是否处于中期分裂相？

中期分裂相细胞染色体数目、形态比较固定，染色体包含两条染色单体，具体见下图：

第三题    有丝分裂指数测定的意义是什么？

中期分裂相指数是指所观察的细胞中中期分裂相细胞的占比，是一项反映细胞增殖程度的指标。

第四题    油镜如何使用？是否要将油镜镜头整个浸入油中？

油镜的使用需要搭配香柏油，香柏油与玻璃的折光率相近，光线穿过载玻片进入香柏油发生折射较少，而进入油镜的光较多，视野较为明亮。油镜使用时，需要将油镜镜头浸入香柏油中，并与玻片接触，使用结束后使用少量二甲苯擦拭干净镜头。

第五题    中期分裂相细胞少是什么原因导致？如何优化？

中期分裂相细胞少的原因如下：

（1）秋水仙素的剂量过小，作用时间过短；

（2）重悬时固定液量过大，细胞密度过低。

优化策略：

（1）秋水仙素剂量大，则作用时间短；

（2）秋水仙素剂量小，则适当延长作用时间，请选择适宜的剂量和时间；

（3）根据细胞的收集量确定重悬体积；

（4）适当增加滴片的数量。

第六题    染色体聚集可能是由哪些原因导致？

染色体聚集的可能原因如下：

（1）秋水仙素用量过多，导致染色体的过度浓缩；

（2）低渗时间不足，导致染色体聚集在一起分散不开；

（3）细胞悬液未充分吹打均匀；

（4）载玻片未进行预冷，玻片表面张力不够；

（5）滴片高度不够。

第七题    染色体分散过度可能是由哪些原因导致？

染色体分散过度的根本原因就是细胞膜破裂。主要由以下可能：

（1）低渗时间过长；

（2）离心速度过高；

（3）细胞操作过程不注意，操作过度；

（4）滴片距离过高。

第八题    染色体畸变试验阅片需要配套什么样的显微镜？如何操作？

染色体畸变试验使用中期分裂相阻断剂（如秋水仙素或秋水仙胺）处理细胞，使细胞停止在中期分裂相，此时染色体形态、数目都比较固定，使用普通生物显微镜即可进行染色体结构畸变观察。先于低倍镜下寻找背景清晰、分散良好、染色体收缩适中的中期分裂相细胞，再于油镜下进行染色体畸变观察并记录。

第九题    玻片想要长期保存，需要如何处理？

如果玻片要长期保存，必须要做好封片（可使用中性树脂胶并加盖玻片），并置于阴凉干燥处保存。

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