应用简介
       质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。
技术原理
       质粒DNA提取方法有3种：碱裂解法、煮沸法和去污剂(如Triton和SDS)裂解法。前两种方法比较剧烈，适用于较小的质粒(<15kb)。去污剂裂解法则比较温和，一般用于分离大质粒(>15kb)。碱裂解法是一种应用为广泛的制备质粒DNA的方法，其原理为：染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为线状分子，而质粒DNA为共价闭合环状分子；当用碱处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发生变性，共价闭环的质粒DNA在回到中性时即恢复其天然构象；变性染色体DNA的片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相中，离心去除沉淀后，就可从上清中回收质粒DNA。目前，市面上质粒提取试剂盒大多数都是采取上述的碱裂解方法，不同之处在于纯化方式。目前比较常用的纯化系统是硅基质吸附材料，其原理为在高盐环境下质粒DNA能够结合到硅基质上，然后用低盐缓冲液或水将质粒DNA从硅基质上洗脱下来。得到的质粒可以用于酶切、PCR、测序、细菌转化、转染等分子生物学实验。
实验方法

技术总结
       1、时间控制问题
       裂解时间太长，加入溶液P2后裂解时间不应超过5分钟；吸附时间不够；溶解时间不够都会导致质粒DNA提取实验失败。
       2、质粒拷贝数低
       由于使用低拷贝数载体引起的质粒DNA提取量低，可更换具体相同功能的高拷贝数载体。
       3、溶液使用不当
       溶液P2、P3在温度较低时可能出现浑浊，应置于37℃保温片刻直至溶解为清亮的溶液，才能使用。
       4、吸附柱过载
       不同产品中吸附柱吸附能力不同，如果需要提取的质粒量很大，请分多次提取。若用富集培养基，例如TB或者×YT菌液体积必须减少；若质粒或宿主菌是非常高的拷贝数或生长率，则需调整LB培养液体积。
       5、质粒未全部溶解
       洗脱溶解质粒时，可适当加温或延长溶解时间。
       6、乙醇残留
       漂洗液洗涤后应离心尽量去除残留液体，树脂型试剂盒漂洗后应晾干树脂，再加入洗脱缓冲液。
       7、洗脱液加入位置不正确
       洗脱液应加在硅胶膜中心部位以确保洗脱液会wan全覆盖硅胶膜的表面达到最大洗脱效率。
       8、洗脱液不合适
       DNA只在低盐溶液中才能被洗脱。洗脱效率取决于pH值。最大洗脱效率在pH7.0～8.5间。当用水洗脱时确保其pH值在此范围内，如果pH过低可能性导致洗脱量低。洗脱时将灭菌蒸馏水或洗脱缓冲液加暖至60℃后使用有利于提高洗脱效率。