昆虫细胞培养基CW003使用介绍参考

产品描述

CW003培养基适用于sf9、High Five等昆虫细胞悬浮培养和瞬时表达，含有细胞生长的全

部营养成分，无需添加物即可使用。

产品特点

Ø 产品不含血清

Ø 即用型培养基，无需添加额外成分

Ø 支持sf9、High Five等昆虫细胞的悬浮培养驯化与高密度培养

Ø 支持杆状病毒载体表达系统生产重组基因蛋白

基础参数

产品使用方法

细胞驯化与传代

1） 培养条件

温度：27oC；推荐摇床转速：110-130 rpm；传代细胞密度控制在0.8-1.2×106 cells/mL。

2） 直接驯化

大部分情况下，培养于其他培养基中的sf9、High Five细胞，可以直接适应至CW003培养

基，只要按照日常传代方式（稀释）更换培养基即可。

3） 渐进式驯化

注意：选用低代次、处于对数的细胞进行驯化。

①在原培养基中复苏细胞并继续使用该培养基传代2到3次至细胞生长稳定，使用原培养基

+CW003培养基（CW003比例从25%至90%）逐渐驯化，传代细胞密度控制在0.8-1.1×106

cells/mL，每48h进行传代。

②待细胞在含90%以上CW003培养基生长正常后，可尝试将细胞传代至100% CW003培养基

中，并连续传代3-4次，如细胞保持稳定生长，即已适应至CW003培养基。

细胞复苏

1） 迅速取出冻存的细胞，在37℃水浴条件下进行快速解冻（可以在水中轻轻晃动，时间控制

在120s以内），至冻存管内剩余小块冰晶。

2） 在生物安全柜中，将融化的细胞全部转移至无菌离心管中，加入10 mL预热至37℃的培养

基，离心换液（175 g，5 min）去除全部上清，加入20-30mL预热至37℃新鲜培养基重悬，后

转移至摇瓶培养。

细胞冻存

1） 冻存细胞时，要选择处于对数、状态良好，活力≥98%的的细胞；

2） 事先计算好冻存的细胞管数和所用的培养基的体积，冻存密度为2.5-3.5×107 （通常冻存

浓度为1.0-2.0×107）cells/ml/支；

3） 细胞冻存液配制：

45%新鲜培养基+45%原培养基（上清）+10%DMSO，充分混匀，存放于4℃，一般为当

天用当天制备；

4） 以175 g，5 min的条件离心收集细胞，弃上清，用冻存培养基（

4℃ ）重悬细胞；

5） 将重悬的细胞液迅速分装细胞到无菌的冻存管中，每支1ml，并贴好标签；

6） 将细胞冻存管放到程序降温冻存盒（注意填充异丙醇，4℃预冷）中，置于-80℃ 冰箱(每

分钟下降1℃)，过夜存放后将细胞转入液氮罐中进行保存。