动物单细胞解离的实质

　　破坏掉细胞间隙维系细胞关联的蛋白质，使细胞分离开来。在动物细胞解离单细胞中通常采用胶原蛋白酶和胰蛋白酶来处理使组织细胞分离成单个细胞，从而制成单细胞悬液。

　　动物单细胞解离步骤

　　1.文献资料查询，样本解离方案确定；

　　2.样品接收（样品接收时的温度检测记录）；

　　3.组织解离器具准备；

　　4.组织剪切和清洗（去除等，剪切程度）；

　　5.酶液中组织的消化（组织转移，杂交炉，计时，中间观察）；

　　6.离心收集细胞（离心）；

　　7.去除死细胞提高细胞活率；

　　8.自动化细胞技术仪对细胞进行计数/台盼蓝荧光显微镜计数。

　　动物细胞的基本特性

　　1.相较于植物细胞动物细胞没有细胞壁较为脆弱；

　　2.动物细胞的体积比微生物细胞大几千倍，稍小于植物细胞的体积；

　　3.动物细胞的直径一般在10μm-30μm；

　　4.大部分动物细胞在肌体内相互粘连以集群形式存在。

　　动物单细胞悬液制备心得

　　人-胰腺

　　Ⅰ、解离

　　该样品是储存于组织保护液中48小时内解离（对于-80℃储存的组织解离时，37℃水浴复苏，可边摇晃边水浴，尽可能缩短复苏时间，保证组织的较好状态）；

　　Ⅱ、组织剪切和清洗

　　由图观察，该组织块较大，且组织表面附有血色斑块物，在组织块较大能够保证获取足量的细胞前提下可将该部分或明显赃物去除，减轻后续除杂压力，避免多次除杂步骤引起的细胞损失；组织块尽量剪碎，可充分被酶液消化；

　　Ⅲ、酶解

　　根据以往解离经验，该组织可采取胶原酶II，37℃酶解（对于较难消化的组织可采取混合酶消化或提高酶量、消化时间）；

　　Ⅳ、计数

　　对于luna细胞计数仪，在计数刚消化下来的细胞且背景较高的细胞，计数虚高仅作为参考（且其中细胞平均粒径这一参数很大程度上偏离解离样本的细胞粒径，计数越不可信）。

　　酶解1-2小时后取液染色镜检

　　经过除杂处理后的最终细胞悬液镜检图

　　解离小tips

　　1）现象：剪碎的组织在消化过程中出现溶液胶状，组织块分布在整个体系中，无法沉于底部

　　建议：可以加入适量的胶原酶II消化0.5-1小时

　　2）现象：镜检下的细胞仍存在细胞间交联的情况

　　建议：可加入适量的DNA酶（可将包裹细胞的基因组进行酶解切断，可改善部分细胞交联现象）

　　3）现象：长时间消化仍未镜检出细胞

　　建议：1、保留剩余组织将上清离心然后以小体积重悬再镜检（过大的体积对于本就细胞数不多的情况下，很难镜检出细胞造成无细胞的假象）；2、使用胶管反复用力吹打组织（可能组织已被消化松散，单细胞仍交联在一起）

　　4）现象：待解离组织块小

　　建议：可采取1.5ml离心管进行消化（使酶充分接触组织、减少试剂用量）

　　5）现象：在使用多种除杂方法后，细胞计数仪仍呈现出较多背景的情况

　　建议：可使用台盼蓝计数，以台盼蓝的计数结果为准

　　1.关于单细胞解离，我们之前已经给大家分享过的有：

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　　3.在成功处理上千例单细胞样本后，我们收获了10个样本解离技巧！

　　4.植物单细胞解离难怎么办？4大技术给您“解题思路”！

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