水是细胞赖以生存的主要环境，营养物质和代谢产物都必须溶解在水中，才能为细胞吸收和排泄。对于体外培养的细胞来说，水是所有细胞培养用液和试剂中较简单、但也是最重要的组分。细胞培养对水的质量要求较高，培养用水中如果含有一些杂质，即使含量极微，有时候也会影响细胞的存活和生长，甚至导致细胞死亡。



水中的杂质对水质有不同影响：

• 离子，平衡渗透压；

• 微生物，污染，改变微坏境如pH，影响增殖，死后释放内毒素等；

• 内毒素，改变细胞外形、活化细胞、促进或抑制细胞分裂、影响细胞附着等；

• 有机物，水中有机物所含碳的总量可间接反映出水中细菌和内毒素的含量，应控制在合理范围内，以免影响细胞培养。

水质评价常用的指标：

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• 电阻率（electrical resistivity），衡量实验室用水导电性能的指标，单位为MΩ·cm，随着水内无机离子的减少电阻数值逐渐变大；

• 异体菌落数（heterotrophic bacteriacount，HBC），衡量实验室用水微生物的指标，单位为cfu/ml

• 有机物（total organic carbon，TOC），水中碳的浓度，反映水中可氧化的有机化合物的含量，单位为μg/L或ppd；

• 内毒素（endotoxin），革兰氏阴性菌的脂多糖细胞壁碎片，又称为“热原”，单位EU/ml。

参考国际标准化组织的实验室纯水规范ISo3696，美国临床试验室标准化协会（Clinical and Laboratory Standards Institute）及美国试验和材料学会（American Society for Testing and Materials）D1193的试剂纯水规范，我国GBT6682和GBT30301的实验用水指导，结合实际的实验操作经验。总结细胞培养的水质要求 ：

• 一定要无菌，HBC＜0.1cfu/ml；

• 无蛋白及核酸酶和内黑素；

• 无内毒素或无热源，＜0.001EU/ml；

• TOC＜3ppd，一些重金属（镉）毒害大，即便是很低剂量（＜0.1ppd）也有影响；

• 电阻率≥18MΩ.cm

细胞培养以及各种培养液和试剂的配置用水均需要经过严格的纯化处理；即使是玻璃器皿，在用自来水清洗过后也应至少用超纯水漂洗三次以上。
目前，市场上供应的纯水装置种类较多， 比如自来水进水同时制备二级纯水和超纯水的一体化纯水装置，可以由自来水进水通过预处理柱、反渗透柱及电去离子（EDI）模块等纯化后达到二级纯化水，储存于水箱中以满足日常的清洗；水箱中的水再经过超纯化柱去离子，紫外灯照射杀菌和降低有机物，最后经终端除内毒素滤器达到无菌无热源的超纯水。




纯水的储存对保持水的质量也是至关重要的，由于周围环境和空气中的二氧化碳更容易使水污染改变其pH，所以储存水的容器要尽量密封，避免和外界过多接触，抑制微生物生长。EVOQUA的Ultra Clear系列超纯水机水箱中内置紫外灯和二氧化碳吸附滤器长期保证水箱中纯水的水质。

对于超纯水而言尤其需要格外注意终端水质的TOC、电阻率、细菌和内毒素的含量，必须做到即取即用。因此取水水质实时监测显得尤为重要。EVOQUA的Ultra Clear系列超纯水机拥有7" 彩色触摸显示屏，可以显示各阶段水质等重要参数和耗材更换倒计时，操作简单直观。UV灯、TOC监测和UF超滤模块保证了优秀的水质。这些装置可有效去除 RNase、DNase 和DNA 等污染物。并可使内毒素水平低于 0.001EU/ml。


EVOQUA 懿华，Ultra Clear TP ED 20 TWF EDI 30 UV UF TM 超纯水机


【注意事项】

1. 超纯水应当注意使用时间，最好即取即用。防止超纯水吸取外界的杂质导致水质下降。

2. 在合适的环境使用超纯水。环境中的挥发性有机物、细菌等都会影响细胞培养。

3. 培养细胞的容器应当洁净无污染。