ELISA实验常用于检测和定量复杂混合物中的特定蛋白质。结果出来后，就需要一定的方法来评估数据是否可靠。主要从以下几个方面进行评估：检测内精度，稀释线性度，回收率，灵敏度（检测限）等。

检测内精度

检测内精度：一般是检测孔板间的重复性。一般用变异系数CV值来评估，变异系数(CV)为标准差σ与平均数µ的比值。每个样品的 %CV 通常应小于 10%，%CV越大代表孔间差异大，重复性不好，结果不可信。

注：CV较大可由以下原因引起: 移液不准确；在使用前确保枪头在移液器上套牢，确保吸取正确的液体量；试剂溅入其他孔中；样本或试剂受细菌或真菌污染；试剂间交叉污染；酶标板各处温度不一致，确保酶标板在远离气流的恒温环境中孵育；部分孔干透，确保酶标板在孵育过程中始终处于被封盖状态。

稀释线性度

稀释线性度：稀释线性度是指不同稀释水平下测试样品的结果精度。不同稀释倍数下的测量值与精确值的比值应该在70%-130%之间。

在没有基质干扰时，无论如何稀释，测量值都和真实值吻合。而有基质干扰时，样品稀释会导致基质被稀释，会造成非特异性结合比例的减少，测量值也会随稀释倍数的改变而改变。

回收率

回收率：回收率用于确定目标物质检测是否受样品基质差异的影响。例如，待测上清液中所含的大量蛋白质可能会阻碍抗体结合，提高信噪比，从而导致目标物质检测的浓度低于实际值。通过将已知浓度的目标物质加入到不同的样品基质中来确定回收率。如果平均回收率为 80%-120%，则认为样品基质对检测准确定量分析物的能力影响最小。回收率=用基质稀释的目标物质的检测值/用基质稀释的目标物质的确定值*100%。

回收率过高或是过低，则提示实验体系受到较大的复杂基质干扰。比如在空白血清中掺入了 1000 pg/mL 的 IL-2，回收率只有 50%，提示血清中有干扰因素影响了抗体与 IL-2 分子的结合。

灵敏度（检测限）

灵敏度（检测限）：灵敏度指可与背景区分的低分析物水平，通常称为分析灵敏度或检测限。一般有三个指标，分别为LOB，LOD，LOQ。

LOB(Limit of blank), 就是我们通常讲的空白检测限。LOB指的是用空白样本去测试，在一定的概率下能测得的最高测量结果。

LOD(Limit of detection), 就是我们通常讲的检测限，就不是用空白样本去检测了，是对低浓度的分析物样本进行测试，在一定的概率的条件下能测得的低值。

LOQ(Limit of quantitation), 就是我们通常讲的定量限，这个也是用低浓度的分析物样本进行测试得出的较低的值，这个值的准确性是有要求的，就是不光要能测到，而且还要保证结果是准确的。

打个比方：比如远处一个物体，随着距离的缩短，你的眼睛从看不见（空白检测限）到能看见（检测限），最后到能确认是什么物体（定量限）。

信噪比

信噪比（Signal/Noise, S/N）就是信号与噪音的比值，也就是样品数据与空白数据的比值。一般以信噪比为 3 : 1 时相应浓度或量确定检测限， 10：1时的量为定量限。

更多酶联免疫试剂盒、缓冲液等生物试剂、试剂盒请进入苏州阿尔法生物进行了解。