贴壁293T细胞和悬浮293T细胞在生物反应器中的高密度培养具有广泛的应用价值。实验中，我们使用片状载体分别对293T贴壁细胞和悬浮293T细胞在固定床生物反应器中进行高密度培养。我们在实验过程中采用连续灌流培养的方法，并借助片状载体来支撑细胞的生长。通过连续观察葡萄糖消耗，我们评估了细胞培养的增殖能力和细胞密度的变化。

实验方法概要：

1. 需要的实验室仪器和试剂：

   - 3.5L固定床生物反应器 x 2

   - 150g 片状载体

   - 贴壁293T细胞

   - 悬浮293T细胞

   - DMEM培养基

   - 葡萄糖溶液

   - 无菌培养皿

   - 离心管

   - 显微镜

2. 贴壁293T细胞的培养：

   a. 在培养皿中加入足够的DMEM培养基，并补充10%的胎牛血清。

   b. 将贴壁293T细胞接种在培养皿中，使其达到对数生长期。

   c. 用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液将细胞从培养皿中解离。

   d. 离心细胞，去除上清液，用DMEM培养基洗涤细胞。

   e. 鉴定细胞数目并调整细胞浓度至2.5×107个/mL。

3. 悬浮293T细胞的培养：

   a. 在培养皿中加入足够的DMEM培养基，并补充10%的胎牛血清。

   b. 将悬浮293T细胞接种在培养皿中，使其达到对数生长期。

   c. 用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液将细胞从培养皿中解离。

   d. 离心细胞，去除上清液，用DMEM培养基洗涤细胞。

   e. 鉴定细胞数目并调整细胞浓度至2.3×107个/mL。

4. 固定床生物反应器的装填：

   a. 准备2个3.5L固定床生物反应器。

   b. 在每个生物反应器中加入75g片状载体。

   c. 用无菌操作将贴壁293T细胞接种在一个生物反应器中，将悬浮293T细胞接种在另一个生物反应器中。

5. 连续灌流培养：

   a. 连续灌流培养开始前，将生物反应器和培养基预热至37℃。

   b. 确保培养基通过生物反应器的速度为1个床体积/小时。

   c. 每隔12小时，取出一定量的培养基样品，用离心管离心10分钟。

   d. 分离上清液并测定葡萄糖浓度。

   e. 根据葡萄糖消耗情况来调整培养基的流速，以维持葡萄糖浓度在合适范围内。

   f. 持续进行连续灌流培养6天，每天观察细胞生长情况和细胞密度的变化。

结果：

贴壁293T细胞和悬浮293T细胞均能在固定床生物反应器中生长。6天后，贴壁293T细胞的细胞密度达到2.5×107个/mL，悬浮293T细胞的细胞密度达到2.3×107个/mL，细胞的增殖约为50倍。

讨论与结论：

本实验结果表明贴壁293T细胞和悬浮293T细胞在固定床生物反应器中均能实现高密度培养。贴壁293T细胞的细胞密度稍高于悬浮293T细胞，但差异不明显。固定床式生物反应器的连续灌流培养方法适用于两种细胞的培养，为后续的生物工程研究提供了可行的培养工艺。该实验方法可为进一步研究和应用贴壁和悬浮293T细胞的生物反应器培养提供参考。

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