如何通过多层细胞工厂进行人多能干细胞hPSC的2D培养
时间:2024-08-19 阅读:198
人多能干细胞(hPSC)具有自我更新和分化为各种细胞类型的潜能,为医学、药物研发和生命科学研究提供了不少贡献。近年来,随着生物技术的发展,hPSC的培养技术不断优化,其中多层细胞工厂作为一种高效的2D培养方法,逐渐受到研究者的关注。本文将为您揭秘如何通过多层细胞工厂进行hPSC的2D培养。
一、多层细胞工厂的优势
1. 高密度培养:多层细胞工厂采用层叠式设计,可充分利用空间,实现细胞的高密度培养,提高产量。
2. 易于操作:细胞工厂的操作简便,便于规模化生产。
3. 条件均一:细胞工厂内环境稳定,有利于细胞生长和分化。
4. 产量可控:通过调整细胞工厂的层数,可轻松实现产量的调控。
二、如何通过多层细胞工厂进行hPSC的2D培养
1. 细胞接种
将hPSC接种到预先处理过的细胞工厂中,确保细胞均匀分布。接种密度可根据实验需求进行调整。
2. 日常培养
接种后第1、3和4/5天进行补料,监测配套烧瓶以确定最佳收获日期(≥ 90%汇合度)。具体操作如下:
(1)将废培养基倒入废液瓶中,更换新鲜培养基。
(2)更换培养基后放回培养箱。
3. 收获细胞
当配套烧瓶汇合度达到90 - 95%时(接种后第5 - 6天)收获细胞工厂的hPSC。具体步骤如下:
(1)将用过的培养基倒入废液瓶中。
(2)用200 mL PBS冲洗细胞工厂。
(3)添加200 mL TrypLE™ Express或0.25%胰蛋白酶-EDTA。
(4)37°C孵育8 - 10分钟。
(5)将200 mL ACF酶抑制溶液或TeSR™-AOF添加到烧瓶中,混匀后倒入无菌1 L瓶中。
(6)用400 mL无菌PBS冲洗细胞工厂,倒入同一无菌收集瓶中。
(7)将细胞悬浮液分装到离心管中,离心后去除残留的解离试剂,重新悬浮并汇集细胞。
三、实验结果
1. 未分化状态的标志物表达
从细胞工厂收获的hPSC表达了未分化状态的标志物,如OCT-4和TRA-1-60,超过90%的细胞均表达这两种标记物。
2. 冷冻后仍保持高活力并有效附着
从细胞工厂收获的单细胞hPSC在-135°C的FreSR™-S中冷冻后,仍保持高活力并有效附着。
3. 三谱系分化
从细胞工厂收获的hPSC具有三谱系分化能力,可分化为定形内胚层、早期中胚层和神经祖细胞。
4. 保持正常核型
从细胞工厂收获的hPSC保持正常核型,扩大培养规模后,细胞未检测到额外的拷贝数变异。
通过本文的介绍,相信您已对如何通过多层细胞工厂进行hPSC的2D培养有了深入了解。多层细胞工厂作为一种高效的2D培养方法,为hPSC的研究和应用提供了有力支持。在今后的研究中,多层细胞工厂将继续发挥其优势,助力hPSC领域的发展。
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