生化试剂和荧光标记探针GSH-FITC;FITC-还原型谷胱甘肽;
时间:2024-12-13 阅读:75
GSH-FITC,即谷胱甘肽(Glutathione,简称GSH)与异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,简称FITC)的结合物,是一种重要的生化试剂和荧光标记探针。
一、分子结构与原理
分子结构:
GSH是一种三肽类化合物,由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成,其分子结构中包含一个巯基(-SH)。
FITC是一种荧光染料,具有明亮的黄绿色荧光,其分子结构中包含一个异硫氰酸基团(-N=C=S)。
结合原理:
FITC的异硫氰酸基团可以与GSH分子中的巯基或氨基发生反应,形成稳定的共价键,从而将荧光素分子标记在GSH上。
二、性质与特点
荧光特性:
GSH-FITC继承了FITC的荧光特性,具有明亮的黄绿色荧光,可以用于荧光成像和检测。
稳定性:
GSH-FITC在适当的储存条件下(如避光、低温)具有较高的稳定性,可以长时间保存。
生物相容性:
由于GSH是细胞内广泛存在的抗氧化剂,因此GSH-FITC具有较好的生物相容性,可以用于细胞内的荧光标记和检测。
三、应用
细胞内GSH检测:
GSH-FITC可以作为荧光探针,用于检测细胞内的GSH水平。通过荧光显微镜或流式细胞仪等手段,可以实现对细胞内GSH的定量分析。
药物递送与追踪:
GSH-FITC可以作为药物递送载体的一部分,将药物分子负载在载体上,并通过荧光标记实现药物的追踪和定位。
生物医学成像:
利用GSH-FITC的荧光特性,可以实现细胞或组织的荧光成像研究,帮助研究者观察复合体系在生物体内的分布和代谢情况。
蛋白质相互作用研究:
GSH-FITC还可以作为探针,研究GSH与细胞内其他分子的相互作用,为深入理解细胞内的生理过程提供有力工具。
四、制备与纯化
制备:
通常需要将FITC溶解在适当的有机溶剂中(如二甲基亚砜,DMSO),然后将GSH溶解在适当的缓冲溶液中(如磷酸盐缓冲液,PBS)。在适当的pH和温度下,将FITC溶液逐滴加入到GSH溶液中,反应数小时至过夜,形成GSH-FITC结合物。
纯化:
反应完成后,需要通过透析、凝胶过滤或高效液相色谱(HPLC)等方法,将未反应的FITC和其他杂质从GSH-FITC结合物中分离出来,得到纯化的GSH-FITC。
五、注意事项
储存条件:
GSH-FITC应储存在避光、低温的条件下,以保持其稳定性和荧光特性。
使用范围:
GSH-FITC仅用于科研目的,不能用于人体实验或治疗。
GSH-FITC是一种具有广泛应用前景的生化试剂和荧光标记探针,其在细胞内GSH检测、药物递送与追踪、生物医学成像以及蛋白质相互作用研究等领域具有重要的作用。