ABTS自由基清除能力检测试剂盒（微量法）

产品货号：BA1868

产品规格：100管/48样

产品简介：

ABTS法可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定，是使用泛的间接检测方法。ABTS经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子ABTS自由基，在405nm或734nm处有最大吸收峰。被测物质加入ABTS自由基溶液后，所含抗氧化成分能与ABTS自由基发生反应而使反应体系褪色，405nm的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。本试剂盒中，通过测定吸光度下降的程度来反映样本清除ABTS自由基的能力。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成：

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前加入1mL蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂可分装后保存，-20℃可保存四周，避免反复冻融；

2. 试剂三工作液的配制：液体置于试剂瓶内EP管中。临用前根据样本量按试剂三（µL）：蒸馏水（mL）=1µL:12mL 的比例配成试剂三工作液，现用现配，用多少配多少，尽量在4h之内用完；

3. 试剂四工作液的配制：可先将试剂四-20℃分装保存。临用前根据样本量按试剂四：试剂一（V:V）=1:9的比例配成试剂四工作液，现配现用，现配现用，用不完的试剂放于-20℃可保存两周。

4. 试剂五：粉剂置于试剂瓶内玻璃瓶中，含有5mg维生素C。临用前加入2.8mL提取液，充分振荡溶解； 配成10mmol/L维生素C溶液，用于阳性对照。2-8℃可保存两周。

5. ABTS工作液的配制：临用前根据样本量按试剂一：试剂二：试剂三工作液（V:V:V）=76:5:4的比例配成ABTS工作液，现用现配，室温避光保存，务必在30分钟内使用。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、台式离心机、研钵/粉碎机、烘干箱、30~50 目筛、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可参考文献）

1. 植物组织样本的制备：将新鲜样本置于60℃烘箱烘干至恒重，研钵研碎（或粉碎机粉碎），过30~50目筛；称取约0.05g样本，加入1mL提取液后置于40℃水浴锅中浸提30min；10000rpm室温离心10min，取上清，置于冰上待测。

2. 红酒、果汁等液体样本：吸取100µL样本溶液加入900µL提取液，旋涡振荡混匀，室温10000rpm离心10min，取上清，置冰上待测。

3. 提取物或者药物：可用提取液配制成一定浓度，如5mg/mL。

注意：不同样本清除ABTS自由基的能力可能相差很大，为保证实验结果的准确性，样本要根据预实验结果进行适当调整（如清除率大于90%，建议将提取的样本用提取液进行稀释；清除率小于5%，建议加大烘干样本质量或液体样本体积进行提取）。

二、测定步骤 

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至405nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2. 阳性对照的准备：若需要线性关系，建议将10mmol/L的维生素C溶液用提取液配制成1、0.8、0.6、0.4、 0.2、0.1mmol/L的维生素C溶液待用，稀释可参考下表；若需要清除率约为90%的阳性对照，则建议将10mmol/L维生素C溶液用提取液配制成大于1mmol/L的维生素C溶液待用。

备注：实验中每个标准管需10µL维生素C溶液。

3. 操作表：在96孔板或EP管中分别加入下列试剂：

三、ABTS自由基清除率的计算

1. 阳性对照的自由基清除率计算公式：

ABTS自由基清除率D_VC% =[(A空白-A阳性对照)÷A空白]×100%。

2. 样本的自由基清除率计算公式：

ABTS自由基清除率D% =[A空白-(A测定-A对照)]÷A空白×100%。

注意事项： 

1. 不同样本清除ABTS自由基的能力可能相差很大，如果要比较不同样本的ABTS自由基清除能力，建议对于同一批样本加入等量的样本，红酒、组织匀浆、果汁等液体样本加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。在比较时，将样本根据预实验结果进行适当调整，比较同样浓度（相同稀释倍数）的清除率大小。

2. 样本建议当天提取当天检测。

实验实例： 

1. 取0.05g辣椒加入1mL提取液进行匀浆研磨，离心取上清后按照测定步骤操作，计算清除率得：

D%=[A空白-(A测定-A对照)]÷A空白×100% =[1.111-(0.365-0.061)]÷1.111×100%=72.637%。