谷氨酸(Glu)含量检测试剂盒（微量法）
时间：2024-09-23 阅读：19
谷氨酸(Glu)含量检测试剂盒（微量法）
产品货号：BA1126
产品规格：100管/96样
产品简介：
Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。
谷氨酸脱氢酶（GDH）催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+，引起340nm处吸光度的上升，通过测定340nm吸光度的变化，计算谷氨酸含量。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
产品内容：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体60mL×2瓶 | 2-8℃ |
试剂二 | 液体2mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂三 | 粉剂×1瓶 | -20℃ |
试剂四 | 粉剂×1支 | -20℃ |
标准液 | 液体0.5mL×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制：
1. 试剂三：临用前加入20mL试剂一；
2. 试剂四：临用前加入1.5mL试剂二；
3. 标准液：10μmol/mL谷氨酸标准品。
技术指标：
检出限：0.0037μmol/mL
线性范围：0.0125-0.2μmol/mL
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
细菌、细胞或组织样品：收集细胞或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次），10000rpm，常温离心10min，取上清待测。
称取约0.1g组织，加入1mL试剂一进行冰浴匀浆，10000rpm，常温离心10min，取上清待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2. 标准溶液的制备 ：将标准品分别稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125μmol/mL的标准溶液。
3. 在有盖EP管中加入下列试剂：
（1）标准管：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL标准溶液、160μL试剂三和10μL试剂四混匀，立即记录 340nm处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2，计算∆A=A2-A1。
（2）测定管：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL样本、160μL试剂三和10μL试剂四混匀，立即记录340nm 处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2，计算∆A=A2-A1。
三、谷氨酸含量计算：
1. 标准曲线的绘制：
以谷氨酸含量（µmol/mL）为x轴，标准管∆A为y轴，绘制标准曲线y=kx+b。将测定管∆A带入方程得到x值（µmol/mL）。
2. 氨基酸含量计算：
（1）按照蛋白浓度计算：谷氨酸含量（µmol/mg）=x×V样本÷（Cpr×V样本）=x÷Cpr
（2）按照样品鲜重计算：谷氨酸含量（µmol/g 质量）=x×V样本÷（W÷V样总×V样本）=x÷W
（3）按照细菌或细胞数量计算：谷氨酸含量（μmol/104 cell）＝x×V样本÷（1000÷V样总×V样本）=0.001x。
V样总：加入提取液体积，1mL；V样本：加入的样本体积，0.04mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；1000：细菌或细胞总数，1000万。
注意事项：
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
谷氨酸(Glu)含量检测试剂盒（微量法）
产品货号：BA1126
产品规格：100管/96样
产品简介：
Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。
谷氨酸脱氢酶（GDH）催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+，引起340nm处吸光度的上升，通过测定340nm吸光度的变化，计算谷氨酸含量。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
产品内容：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体60mL×2瓶 | 2-8℃ |
试剂二 | 液体2mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂三 | 粉剂×1瓶 | -20℃ |
试剂四 | 粉剂×1支 | -20℃ |
标准液 | 液体0.5mL×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制：
1. 试剂三：临用前加入20mL试剂一；
2. 试剂四：临用前加入1.5mL试剂二；
3. 标准液：10μmol/mL谷氨酸标准品。
技术指标：
检出限：0.0037μmol/mL
线性范围：0.0125-0.2μmol/mL
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
细菌、细胞或组织样品：收集细胞或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次），10000rpm，常温离心10min，取上清待测。
称取约0.1g组织，加入1mL试剂一进行冰浴匀浆，10000rpm，常温离心10min，取上清待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2. 标准溶液的制备 ：将标准品分别稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125μmol/mL的标准溶液。
3. 在有盖EP管中加入下列试剂：
（1）标准管：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL标准溶液、160μL试剂三和10μL试剂四混匀，立即记录 340nm处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2，计算∆A=A2-A1。
（2）测定管：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL样本、160μL试剂三和10μL试剂四混匀，立即记录340nm 处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2，计算∆A=A2-A1。
三、谷氨酸含量计算：
1. 标准曲线的绘制：
以谷氨酸含量（µmol/mL）为x轴，标准管∆A为y轴，绘制标准曲线y=kx+b。将测定管∆A带入方程得到x值（µmol/mL）。
2. 氨基酸含量计算：
（1）按照蛋白浓度计算：谷氨酸含量（µmol/mg）=x×V样本÷（Cpr×V样本）=x÷Cpr
（2）按照样品鲜重计算：谷氨酸含量（µmol/g 质量）=x×V样本÷（W÷V样总×V样本）=x÷W
（3）按照细菌或细胞数量计算：谷氨酸含量（μmol/104 cell）＝x×V样本÷（1000÷V样总×V样本）=0.001x。
V样总：加入提取液体积，1mL；V样本：加入的样本体积，0.04mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；1000：细菌或细胞总数，1000万。
注意事项：
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。