半胱氨酸(Cys)含量检测试剂盒(微量法)
时间:2024-10-15 阅读:143
半胱氨酸(Cys)含量检测试剂盒(微量法)
产品货号:BA1048
产品规格:100管/96样
产品说明:
蛋白质含有三种含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和半胱氨酸(Cys)。其中,Cys是一种含有巯基的含硫 氨基酸,从甲硫氨酸转化而来,并且可与胱氨酸互相转化。Cys参与蛋白质二硫键的形成,经常是蛋白质活性中心的组成部分,还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外,Cys大量积聚在皮肤和粘膜表面,在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性,并且补充巯基,以维持皮肤的正常代谢,调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色 素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
Cys还原磷钨酸生成钨蓝,在600nm处有吸收峰;通过测定600nm吸光度,计算Cys含量。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品内容:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体50mL×1瓶 | 4℃ |
试剂一 | 液体15mL×1瓶 | 4℃ |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | 4℃ |
试剂三 | 粉剂×1支 | 4℃ |
溶液的配制:
1. 试剂二:用前一天,向试剂二中加2mL蒸馏水充分溶解,再加磷酸0.5mL,混匀后盖紧(防止水分散失)沸水浴2h;冷却后加8mL蒸馏水,4℃可保存2周。
2. 标准品:10mg半胱氨酸。将标准品加入4.13mL蒸馏水,可得到20μmol/mL的标准液。4℃可以保存4周。
技术指标:
检出限:0.0066μmol/mL
线性范围:0.03125-3μmol/mL
所需的仪器和用品:
低温离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、磷酸和蒸馏 水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 液体样本中半胱氨酸提取:取0.2mL液体样本,加提取液0.3mL,充分混匀,11000rpm 4℃离心10min,取上清液待测。
2. 组织中半胱氨酸提取:称取约0.2g组织,加入提取液0.5mL,冰上充分研磨,11000rpm 4℃离心10min,取上清液待测。
二、测定步骤
1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到600nm,蒸馏水调零。
2. 标准液的配制:将标准品加入0.826mL蒸馏水,可得到100μmol/mL的标准液,然后用蒸馏水稀释为2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL浓度的标准溶液。
3. 按下表步骤加样:
试剂名称(μL) | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
工作液 | 40 | - | - |
标准品 | - | 40 | - |
蒸馏水 | - | - | 40 |
试剂一 | 100 | 100 | 100 |
试剂二 | 60 | 60 | 60 |
混匀后室温静置15min,于600nm处测定吸光值。
三、半胱氨酸含量计算
1. 标准曲线的绘制:
以各标准溶液浓度为x轴,以∆A(A标准管-A空白管)为y轴做标准曲线,得到方程y=kx+b。将(A测定管-A 对照管)带入方程求x值。
2. 半胱氨酸含量计算:
(1)按液体样本的体积计算
半胱氨酸含量(μmol/mL)=x×V样总÷V样1= 2.5x
(2)按样本质量计算
半胱氨酸含量(μmol/g 质量)= x×V样2÷(W×V样2÷V样总)=0.5x÷W
V样1:提取体系中加入的样本体积,0.2mL;V样2:反应体系中加入的样本体积,0.04mL;V样总:提取体系体积,0.5mL;W:样本质量,g。
注意事项:
如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。