吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色试剂盒

产品货号：26330

产品规格：100T

产品简介：

  细胞凋亡(Apoptosis)的检测方法有形态学、生物化学、DNA的片段化检测方法以及TUNEL等标记片段化DNA 方法，但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑，使用显微镜进行的形态学观察也是很重要的。细胞死亡 的检测可以通过荧光色素染色区分活细胞、死细胞，测定细胞代谢活性和形态学观察。这些方法都是利用细胞凋 亡这种情况进行测定的，因而不一定反映实际情况。MTT法是测定线粒体中*酶的活性，反映细胞数目的变化， 其结果与细胞死亡的数目未必*一致。

 吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色试剂盒(Acridine Orange, AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA,属于异染性荧光染料，AO常用于 细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这 种结合方式主要为AO与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO 与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO与RNA的结合，其荧光发射峰为 640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此，吖啶橙嵌合到双链DNA分子中显绿色， 与DNA单链或RNA结合时发橙红色荧光。

  溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)嵌合到双链DNA或RNA的碱基对中，无碱基特异性，发红色荧光。吖啶橙可 透过活细胞膜，EB不能通过与活细胞膜具有相同通透性的细胞膜。

产品内容:

产品名称 规格 保存温度 试剂（A）：AO solution 200ul 4℃，避光 试剂（B）：EB solution 200ul 室温 试剂（C）：AO/EB Dilution Buffer 50ml 4℃，避光

自备材料：

1. 荧光显微镜

2. PBS

3. 细胞计数板

4. 载玻片、盖玻片

操作步骤（仅供参考）：

1. AO/EB工作液的配制：取试剂（A）、试剂（B）、试剂（C）,试剂（A）：试剂（B）：试剂（C）按照一 定的比例稀释成AO/EB工作液。

2. 每份细胞样品中加入AO/EB工作液，混合均匀。

3. 低速离心：离心，弃上清。

4. 用AO/EB Dilution Buffer重悬细胞，细胞计数，将细胞密度调整。

5. 细胞悬液中，加入AO/EB工作液，充分混匀。

6. 取洁净载玻片，滴加上细胞悬液，轻轻盖上盖玻片。

7. 在荧光显微镜B域进行观察。 染色结果： 活细胞 绿色荧光 死细胞 橙色荧光

注意事项：

1. 用能通过活细胞膜与DNA结合后发蓝色荧光的Hoechist 33342和只能通过死细胞与DNA结合后发红色荧光 的碘化吡啶( propidium iodide，PI)对细胞进行双染的方法也比较常用。

2. 如有低温离心机进行离心效果更佳。

3. 操作过程中应注意减少试剂(A)、试剂(B)暴露于强光下的时间。

4. EB solution有一定毒性，请小心操作。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：

6个月有效。