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生产厂家厂商性质
上海市所在地
产品货号：G6230
产品规格：10ml/50ml
产品简介：
可以对细胞周期与细胞凋亡进行分析。碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌 合到双链DNA和RNA的碱基对中并与之结合的荧光染料，无碱基特异性。碘化丙啶与双链DNA结合后可以产生 荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。
细胞内的DNA被Propidium Iodide染色后，可以用流式细胞仪对 细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡的分析。碘化丙啶染色 后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在 进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1～2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA的片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA的片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检 测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。细胞凋亡时，流式细胞检测可呈现亚二倍体核型的特征，根 据光散射的特点，PI染色可以区分细胞凋亡和细胞坏死的细胞峰型。细胞凋亡时，出现凋亡细胞皱缩、染色质浓 缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的前向光散射低于正常。
在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显 著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。细胞坏死 时细胞多表现为细胞肿胀，因此前向光散射高于正常，对侧向光散射高于正常。
主要由PI、破膜剂等组成，经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周 期与细胞凋亡检测，亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。PI染色液工作浓度为20～50μg/ml，不含RNase，*用 于RNA染色，细胞检测含量范围一般为0.1～1×106之间。
产品内容:
| 产品名称 | 规格 | 保存温度 |
|---|---|---|
| 碘化丙啶PI染色液（50µg/ml） | 10ml/50ml | -20℃，避光 |
自备材料：
1. 胰蛋白酶消化液
2. 流式细胞仪
3. PBS
4. 预冷固定液：预冷的70%乙醇或4%多聚甲醛
操作步骤（仅供参考）：
1. 细胞样品的制备：
⑴贴壁细胞：
① 小心收集细胞培养液到一个无菌离心管内备用。
② 用胰蛋白酶消化细胞至可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的 贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。
③ 收集上述细胞悬液到离心管内。
④ 4℃，1000g离心3～5min，使细胞沉到管底。小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl培养液，以免吸走细胞。
⑤ 加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。
⑥ 4℃，1000g离心3～5min，使细胞沉到管底。
⑦ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS，以免吸走细胞。
⑧ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
⑵悬浮细胞：
① 4℃，1000g离心3～5min，使细胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl培养液，以免吸走细胞。
③ 加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。
④ 4℃，1000g 离心3～5min，使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS，以免吸走细胞。
⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
2. 细胞的固定：
加入1ml冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定2h或更长时间。4℃固定12～24h 可能效果更佳。
3. 细胞的清洗：
①4℃，1000g 离心3～5min，使细胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl溶液，以免吸走细胞。
③ 加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。
④4℃，1000g离心3～5min，使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS，以免吸走细胞。
⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
4. PI染色：
在每个待检细胞样品中加入500μl配制好的PI染色工作液，轻轻重悬细胞沉淀，置于37℃避光水浴 30min。
5. 检测与分析：
用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散 染色结果： 凋亡细胞G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型，在光散射谱上，前向光散射低于正常，侧向光散射高于正常。
注意事项：
1. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。
2. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
3. 在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当提高离心力或延长离 心时间。
4. 如果用于组织的细胞周期不细胞凋亡检测，则必须把组织消化后，制备成单细胞悬液，才可以进行检测。
5. 细胞凋亡时，凋亡细胞的标志之一是DNA可染行降低，但这种情况并是的，DNA含量的降低或者 DNA 与染料结合能力下降也会导致 DNA 可染行降低，在分析的时候应特别注意。
6. PI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： -20℃储存，6个月有效。4℃储存, 1 个月有效。
