荧光/光吸收法过氧化氢定量试剂盒

产品货号：26310

产品规格：100 次/500 次

产品简介：

      荧光/光吸收法过氧化氢定量试剂盒用于定量分析细胞及酶水平的过氧化氢含量。

      在过氧化物酶的存在下，Reagent A 能够与过氧化氢以 1：1 的比例反应，生成物有红色荧光，该荧光可在激 发光 571nm，发射光 585nm 处被监测（激发光亦可用 530-571nm 波长激发，发射光可用 580-590nm 监测）。

      荧光/光吸收法少检测限为 50nM 过氧化氢。

包装清单:

操作步骤：

1. 普通样品过氧化氢含量测定:

2. 用超纯水将 10×Reaction Buffer 稀释为 1×Reaction Buffer。

3. 于 96 孔板中每孔加入 94μl 1×Reaction Buffer。

4. 于 96 孔板中加入 5μl 样品，不足 5μl 的用 1×Reaction Buffer 补足 5μl。

5. 于 96 孔板中加入 0.5μl Reagent A，0.5μl Reagent B。

6. 37℃避光孵育 5min。

7. 用酶标仪激发光 571nm，发射光 585nm 检测（激发光亦可用 530-571nm 波长激发，发射光可用 580-590nm 监测），分析数据。

8. 可选：除步骤 6 所示荧光检测，亦可在 560nm 处检测吸光度以用于数据分析。

9. 背景扣除：除待测样品孔，需做空白孔（用 5μl 1×Reaction Buffer 代替样品）检测背景值。

细胞内过氧化氢含量测定：

1. Reaction mixture 制备：每个样品准备 100μLReaction mixture。包含：0.5μl Reagent A，0.5μl Reagent B， 10μl 10×KRPG Buffer，89μl 超纯水。根据实验样品数，准备适量 Reaction mixture。

2. 将 100μl Reaction mixture 加入 96 孔板中，37℃避光孵育 5min 备用。

3. 细胞样品制备：准备收集约 1.5×10 4个细胞于 1.5ml 离心管中，PBS 清洗后 3000rpm 离心 5min，

4. 弃上清。

5. 加入 20μL KRPG buffer 悬浮的细胞（约 1.5×10 4个细胞）于步骤 2 的 96 孔板中，37℃避光孵育 10min。 如需空白对照，以 20μL KRPG buffer 代替细胞，作为空白对照孔。

6. 用酶标仪激发光 571nm，发射光 585nm 检测（激发光亦可用 530-571nm 波长激发，发射光可用 580-590nm 监测），分析数据。

7. 可选：除步骤 5 所示荧光检测，亦可在 560nm 处检测吸光度以用于数据分析。

注意事项 ：

1. Reagent A 和 Reagent B 为光敏试剂，请避光保存。

2. 待测样品中，DTT 或β巯基乙醇浓度不得高于 10μM。

3. 待测样品 pH 值需小于 8.5。

4. 建议每次使用前用过氧化氢做标准曲线。