核糖体提取试剂盒

产品货号：BA1804

产品规格：50T/100T

产品简介：

核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoprotein particle)，主要由RNA和蛋白质构成，其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链，所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。核糖体无膜结构，主要由蛋白质(40%)和RNA(60%)构成.核糖体按沉降系数分为两类，一类存在于细菌等原核生物中，另一类存在于真核细胞的细胞质中。他们有的漂浮在细胞内，有的结集在一起。

核糖体提取试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的核糖体的提取。

本试剂仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

产品组成：

自备仪器和试剂耗材：
仪器：离心机、涡旋混匀器、Dounce匀浆器、移液器、冰箱、冰盒
耗材：离心管、吸头
试剂：PBS(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)，也可用HBSS

使用方法：
使用注意事项：

1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

3. 最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通1ml玻璃匀浆器匀浆也可。

细胞核糖体提取：

1. 取1-2×10⁷个细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；

2. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
【注】：在500g条件下离心5分钟。

3. 加入500μl-1ml冷的试剂A，置冰上10分钟。

4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下。

5. 将匀浆液在4℃，1000g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。

6. 将上清在4℃，20000g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。

7. 将上清在4℃，100000g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
【注】：如果条件允许，可将离心时间延长到24小时。

8. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。

9. 在4℃，100000g 力条件下离心60分钟。
【注】：如果条件允许，可将离心时间延长到24小时。

10. 弃上清，沉淀用核糖体保存液重悬。

11. 即得到核糖体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

组织核糖体提取：

1. 取50-100mg 鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。

2. 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
【注】：在500g条件下离心5分钟。

3. 加入500μl-1ml冷的试剂A，置冰上10分钟。

4. 用Dounce匀浆器充分匀浆30-40下，至无明显固体团块。然后在4℃，1000g力条件下离心5分钟。

5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。

6. 在4℃，20000g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。

7. 将上清在4℃，100000g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
【注】：如果条件允许，可将离心时间延长到24小时。

8. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。

9. 在4℃，100000g力条件下离心60分钟。
【注】：如果条件允许，可将离心时间延长到24小时。

10. 弃上清，沉淀用核糖体保存液重悬。

11. 即得到核糖体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

保存条件：2-8℃，12个月有效。