人肾小管上皮细胞HK-2属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16 E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV- 16 E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pL XSN 16 E6/E7转染外生包装细胞Psi-2；Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，最后将PA317细胞产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。Southern和FISH分析显示， HK- 2细胞来源于单克隆。PCR检测证实，HK 2细胞基因组中含有E6/E7基因。

一．实验所需材料
①仪器：CO2培养箱、倒置显微镜超净台、离心机、37℃水浴锅。
②材料：于液氮中保存的人肾小管上皮细胞HK-2细胞冻存管、培养瓶、离心管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯、记号笔、镊子、灭菌细胞培养瓶。
③试剂：*培养基（RPM11640或DMEM）、0.25%胰蛋白酶、PBS液。
二．实验操作步骤
①调配37- 40℃的温水，或将恒温水浴箱的温度调节至37-40℃。
②操作者戴上眼镜或面罩、戴好手套，将要复苏的细胞冻存管从液氮罐中取出，迅速将细胞冻存管放人37~ 40℃水浴锅中，可用镊子夹住细胞冻存管，不断轻摇至*融化（尽量在1min内完成）。
③将融化好的细胞冻存管放入离心机，800-1000r/min离心5 min。
④离心后，细胞下沉，在超净工作台中，倒弃上清液，用毛细管吸适量营养液加人细胞冻存管中，并轻轻吹吸数次，将下沉的细胞吹散悬浮后吸人加有适量营养液的细胞培养瓶中，置5%CO2、37℃孵箱培养。次日可以换液，弃去漂浮的死亡细胞，此时存活的细胞大部分可贴壁生长并增殖，一般一支细胞冻存管复苏后接种一瓶，培养3~5d方能长好。根据需要及细胞生长情况进行抗体活性的检测、细胞的传代、扩大培养或细胞的冻存等。
三．注意事项
①整个操作都需在无菌条件下操作，严防污染。
②将细胞冻存管从液氨罐中拿出时，要注意防止人员冻伤：如果安瓿塔封不严，在保存过程中液氨进人安瓿中，从液氮罐中取出时由于温度升高导致液氨急速气化而爆炸，使安瓿变得粉碎，飞溅的玻璃碎片可伤害手及面部等。为了防止液氮挥发引起爆炸工作人员尽量佩戴眼镜或面罩，戴手套。安瓿投人存放温水的器皿中反应后立即把盖子扣上，以防发生意外。
③在细胞复苏操作时，应注意融化冻存细胞速度要快，可不时摇动安瓿或冷冻管，使之尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。这样复苏的冻存细胞存活率高，生长及形态良好。然而，由于冻存的细胞还受其他因素的影响，有时也会有部分细胞死亡。此时，可将不贴壁、飘浮在培养液上（已死亡）的细胞轻轻倒掉，再补以适量的新培养液，也会获得较为满意的结果。
④细胞复苏时应根据细胞对营养的要求选择不同的培养液，如一般细胞复苏时用DMEM培养液；杂交瘤细胞复苏时所用的营养液为含20%小牛血清的RPMI1640培养液，且在培养液中要加入一定量的饲养细胞。

我们推荐使用尚恩生物HK-2（人肾小管上皮细胞）*培养基（产品货号：SNLM-165）作为体外培养HK-2（人肾小管上皮细胞）的培养基。