使用自动细胞计数器的三个tip

市场上近几年涌现出不少自动细胞计数器。这种仪器利用光学显微镜技术，但带来了更高的准确性、重复性，并将这一单调的工作自动化。样品体积小也是这种细胞计数器的额外优势。许多仪器使用一次性的玻片，只需要10-20 uL样品。将玻片插入自动细胞计数器中，照相机捕获图像。随后内置的软件分析图像，显示细胞数量等信息。
在此，专家介绍了使用自动细胞计数器的三个tip。
准确对焦
与其他光学显微镜一样，仪器的准确对焦对于计数很关键。在手动计数时，训练有素的大脑可轻松鉴定细胞。然而，自动细胞计数器内的照相机检测活细胞的亮中心和暗边缘，将其处理成黑白像素信息。如果细胞未准确对焦，那么亮中心将有明显的灰度，会被误认为是死细胞。
大部分研究人员将会发现对焦并不难，只要显示在屏幕上的图像质量与传统的显微镜相似。确保你有一张清晰的图像，这很重要。另一点是要了解细胞计数器中照相机的分辨率。如果自动细胞计数器以低的帧速显示，如每秒小于15帧，那么显示的图像将不能实时响应聚焦旋钮的微调。
控制玻片之间的差异
大部分基于图像的自动细胞计数器都使用一次性的玻片，其上有明确的测量区域。这一测量区域被物镜的放大率和照相机的图像传感器大小所设定。这些细胞计数器通常测定0.4-0.5 uL样品，相当于血球计数器的4-5个大方格。
与血球计数器不同，计数玻片通常只使用一次。因此，玻片之间的差异会显著影响细胞计数的结果。对于某一组实验，好使用同一批号的玻片，尽量避免这些差异。在更换批号时，也建议用标准的微珠来检验玻片。大部分细胞计数器制造商都提供已知浓度的标准微珠。使用相同的微珠样品来检验不同的玻片，将有助于发现差异。
评估软件的分簇性能
自动细胞计数器的核心是开展分析的软件，它相当于手动计数时的人脑。大部分的自动细胞计数器包含集成软件，能准确地计算单细胞群体的数量。然而，在谈到成簇细胞的计数时，细胞计数器就会存在明显差异。由于从培养细胞中获得的样品并不总是单细胞群体，因此，有时会有多个细胞团块，而自动细胞计数器的分簇（declustering）性能也仔细评估。评估分簇性能时可开展图1的检测。
图1. 将HL-60细胞加热到70°C，处理20分钟，杀死细胞，获得死细胞样品。随后利用两款不同的自动细胞计数器进行样品的检测。在细胞计数之后，根据软件捕获的图像进行比较。红色圆圈：死细胞；蓝色圆圈：活细胞；黑色圆圈：排除的对象。
自动细胞计数器正在取代单调乏味的手动计数方法。随着对一些基本原理的了解，自动细胞计数器将帮助你获得佳的结果。