如何练就细胞计数神功?
时间：2022-07-18 阅读：445
对于大多数需使用细胞系的操作，如转染、细胞融合技术、冷冻保存和传代培养等，有必要在操作前对细胞数进行定量。因为如果接种细胞的密度过高，实验还没结束细胞就会出现接触抑制，影响细胞状态，蛋白的表达也会受到影响；但如果密度过低最后收集到的样品过少，检测不到，我们要花额外的时间等待细胞长到合适的密度。
使用相同数量的细胞将保持最佳生长，并有助于使用细胞培养的程序标准化，这反过来也使结果具有更好的再现性。所以细胞计数非常重要，它是一个实验成功的基础。
文章开头提到的血球计数板是以往细胞计数常用的方式，它的使用较为耗时，还易受操作者主观判断的影响，并且某些细胞类型，如形成簇的细胞类型，难以用这种方法计数。
现有的细胞计数设备可提供替代的细胞定量方法，这就包括我们的Scepter™细胞计数仪。
Scepter™细胞计数仪采用“计数金标准”库尔特原理。
Scepter感应器吸入精确的样本体积；
细胞穿过感应器小孔时，电阻值增加。电阻值的增加导致电压的增加；
每个细胞经过时引起的电压的增加作为一个脉冲被记录下来；
用直径和细胞数目绘制直方图，脉冲的大小代表细胞的大小，脉冲的数目代表细胞的个数。
最大的特点是：
计数精准，提供基于细胞大小的直方图（如上图）；
手持式体积小巧；
可以给出细胞体积；
可以进行复杂的混合型的细胞计数；
计数迅速，平均在30秒之内完成计数（最快14秒）。
检测范围与应用
基于细胞直径以及样品浓度的感应器选择指南：
样本浓度范围 （个/毫升） | 50,000-1,500,000个/毫升 | 10,000-500,000个/毫升 |
直径范围(µm) | 4-20 µm | 6-36 µm |
适合测量的颗粒直径范围 | 5-15 | 8-25 |
| 感应器规格 | 40 µm | 60 µm |
|---|
人体细胞中最小的是血小板，直径只有约2微米；最大的是成熟的卵细胞，其直径在200微米左右，鸵鸟卵细胞甚至可以达到长15～22厘米,直径14至15厘米。细胞的直径和大小会直接影响覆盖度百分比，同样的接种浓度，COS7和293细胞最终的覆盖度有着极大的区别。
让我们来看看在分离PBMC后和流式直接对比的数据：
外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell, PBMC)是外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。外周血单个核细胞主要的分离方法是Ficoll-hypaque(聚蔗糖－泛影葡胺)密度梯度离心法。
离心获得PBMC后分别染色通过流式进行分群(Lymphocyte 和Monocyte)和计数，ScepterTM3.0的结果和流式在趋势上具有很好的相关性。
无论是分群还是计数的回归系数都达到了0.98以上。Scepter3.0可以准确对PBMC细胞进行计数和分群。
