细胞学堂 | 细胞转染必看的常见问题盘点
时间：2024-09-18 阅读：1122
细胞转染是将外源性核酸（如DNA、RNA）引入细胞内的一种技术，它主要用于基因表达、基因编辑（基因敲入/敲除）、蛋白质功能以及细胞功能研究等。简单来说，通过转染，我们可以将新的遗传信息带入细胞，观察这些信息对细胞行为的影响。
本期，我们将为大家带来细胞转染分类的介绍与常见问题解析，帮助您快速上手，确保细胞转染实验顺利进行。
细胞转染分类
根据转染方式分类
化学转染：
使用化学转染试剂（如脂质体、阳离子聚合物等）将核酸包裹并引入细胞。这种方法操作简便，适用于多种细胞类型。
物理转染：
利用物理手段（如电穿孔、显微注射、基因枪等），使细胞膜暂时性开放或直接将核酸注入细胞。这种方法适用于部分难以转染的细胞类型，但需要专业设备。
生物转染：
利用病毒载体（如慢病毒、腺病毒等）将核酸导入细胞。病毒转染效率高，但同时成本高且具有一定安全风险。
根据转染是否把外源核酸
整合到宿主染色体分类
瞬时转染：
将外源性核酸引入细胞，使其在短时间内表达目标基因，不整合在细胞的染色体上。核酸在细胞内仅存在较短时间，适合于需要快速获取数据的实验，能够迅速检测基因功能或表达。
稳定转染：
将外源性核酸引入细胞，使其整合到细胞染色体中，实现长期表达。通过筛选和扩增，虽然建立过程较长，但提供了稳定的表达系统，适用于生产和长期研究。
细胞培养注意事项
01
如何选择合适的转染方法？
目前细胞转染主要有物理、化学和生物三类转染方法。物理转染需要特定仪器、耗材及充分的转染参数测试，才能获得较好的转染效果，一般实验室无法满足物理转染的硬件要求；化学转染是目前较为通用的一种方法，其凭借价格便宜、操作简单而被广泛使用；但部分类型细胞对化学转染不敏感，转染效率低，此类细胞可尝试生物转染方法，也就是通过病毒进行转染。但是需要注意的是，如果细胞自身是难转染类型，即使用病毒感染也不一定会获得理想的转染效果。
02
为什么细胞转染效率不高？
细胞转染效率不高可能是受到了以下因素的影响：
细胞类型和状态：转染试剂对不同细胞的转染效率不尽相同；转染前细胞状态对转染效率影响较大，此外，细胞密度也会影响转染效率。
转染试剂使用量：转染试剂用量过多或过少都可能影响转染效果，可根据说明书推荐的使用量进一步梯度摸索，确定目标细胞的最佳转染条件。
核酸质量：使用的DNA或RNA质量不佳（如降解或污染）会影响转染效率。
转染操作：例如制备转染复合物时孵育时间过长、转染后的细胞孵育时间不够等都可能导致效率下降。
03
配制转染复合物时一定要用无血清培养基吗？
通常在准备核酸和转染试剂稀释液时，建议使用无血清的培养基或转染试剂自带的组分。因为血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，蛋白质可能干扰阳离子脂质体/聚合物对核酸的吸附，影响转染效率。现在市售的部分转染试剂进行了一些改进，可以在转染时使用含血清的培养基，所以配制转染复合物时，可根据使用的具体转染试剂说明书，选择是否使用无血清培养基。
04
电转后细胞死亡率高，如何调整优化？
细胞状态：细胞电转前，保证细胞生长状态良好，排除细胞污染情况。
细胞密度：确保电转细胞的密度适中，细胞密度过高或过低都可能影响转染效果和细胞存活率。
电转参数：优化电压、脉冲时间和脉冲次数，针对目标细胞，确定最佳的电转参数。
电转缓冲液：使用合适的电转缓冲液，确保能够有效导电，同时减少细胞损伤。
05
转染了抗性基因的细胞加药筛选后，为什么都死了？
可能是受到了以下因素的影响：
加药时间：细胞在转染带抗性基因的质粒后，需要24-48 h表达抗性基因，避免过早加入药物进行筛选，一般建议转染48 h后再加药，具体时间可以预实验摸索下。
加药浓度：若药物浓度设置过高，超过了抗性基因能够应对的范围，导致即使转染了抗性基因，细胞也无法存活。
抗性基因：抗性基因选择错误或转染过程中抗性基因发生突变或丢失，都会导致细胞抗性功能丧失。
以上是关于细胞转染的分类介绍与常见问题解析，更多细胞培养干货，请持续关注细胞学堂专栏~
