一、传代培养

　　传代前准备--胰蛋白酶消化--吹打分散细胞--分装稀释细胞--继续培养

　　1)将培养瓶内旧的培养液弃掉，然后用D-Hanks液洗两次，(一定要洗干净，以免影响胰酶的消化作用)。

　　2)加入0.25%胰酶-EDTA消化，25cm培养瓶加0.4ml，37度消化5min，镜下看到细胞变圆，间隙增大。

　　3)立即加含10%FCS的培养液终止消化，用细胞刮刀轻刮，注意，这时候用吸管吹不下来，但是刮刀却很容易刮下来，而且对细胞的损伤极小。

　　4)离心，弃上清，加新的培养液(10%FCS)，小心吹匀，分装入新的培养瓶。

　　二、注意事项

　　1、不要轻易改变培养液，我曾经把MEM换成1640后，细胞传几代后莫名其妙死亡。

　　2、如果想节省消化液，上面第2步可换成3-5mlDPBS洗，主要是去除培养瓶里会影响消化液作用的成分。

　　3、自配消化液一定要调PH（=7.8-8）值，并且注意分装，-20度保存，避免反复冻融，用前37度预热，消化较好较快。

　　4、严格的无菌操作。

　　5、适度消化：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。