l 细胞鉴定

STR鉴定已通过

l 细胞来源

国家资源库

l 细胞背景

从 1978 年复发的急性单核细胞白血病 (AML) 的 1 岁男孩的外周血中建立。该细胞可以吞噬乳汁珠和激活的红细胞，无表面和胞质免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA诱导单核细胞分化。

注意：NRAS 突变在 PubMed= 9379676 中被错误地指示为p.Gly12Ser。

l 细胞特性

1） 来源：急性单核细胞白血病，单核细胞

2） 形态：单核细胞，悬浮

3） 含量：>1x106 细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用

l 培养条件

1） 准备RPMI-1640（推荐awcell-0002）培养基；优质胎牛血清，10%；0.05 mM β－qiu基乙醇(细胞培养级 推荐：awcell-8211)；双抗，1%。

2） 参考传代比例：传代时控制细胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在细胞生长至8-10 ×105cell / mL时进行传代。

3） 参考换液频率：传代时换液。

4） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

5） 冻存液：*培养液95%，DMSO 5%（使用该冻存液后，按照我库的经验复苏存活率约50%，复苏后需要额外培养7-10天才能恢复生长）

l 注意事项

【注意事项】：

该细胞为悬浮细胞，根据培养经验以及客户的反馈，传代时使用【半换液法】对细胞状态较为有利，因此我库建议您使用【半换液法】进行传代。

1. 您在收到我们提供的用15ml离心管发货的细胞后，请不要通过离心的方式收集细胞，可以先准备两个新的T25培养瓶，然后将细胞混合均匀后移入两个新的T25培养瓶中，补加培养基到10ml。放入到37℃培养箱中。

2. 您在收到的是用T25培养瓶发货的细胞，请先通过离心的方式收集细胞，然后将细胞重悬加入12ml按照说明书要求配置的*培养基吹打均匀后移入两个新的T25培养瓶中培养即可。

3. thp-1悬浮细胞。该细胞在培养时更喜欢温和处理，培养时尽量少对细胞进行离心处理以此造成对细胞的伤害。换液时不要全培养基更换，建议您使用【半换液法】进行传代，添加细胞培养基以稀释细胞至维持密度即可。

4. 细胞对血清质量较为敏感，我库建议您使用进口品牌优质血清进行培养。FBS不要灭活，如果细胞生长缓慢请尝试使用其他FBS或暂时将FBS浓度增加到20%

5.该细胞的培养液中需添加β-qiu基乙醇（细胞培养级别），若不添加，可能会对细胞状态造成影响。

β-qiu基乙醇的稳定性有限，不可将β-qiu基乙醇添加到*培养基中长期储存，在每次传代或液体添加时再添加β-巯基乙醇。

β-qiu基乙醇（2-qiu基乙醇）被添加到淋巴细胞或其他细胞培养物中，因为在培养基中使用的FBS中氨基酸半胱氨酸供不应求，而胱氨酸则很多。有些细胞（例如T细胞）无法将半胱氨酸转运到细胞质中，必须将其转化为半胱氨酸。β-qiu基乙醇将胱氨酸还原为可被细胞转运的形式，然后转化为细胞生长所需的半胱氨酸。  β-qiu基乙醇还是一种还原剂，可以分解培养中细胞产生的许多有毒代谢产物，从而改善细胞周围的环境。

6.该细胞对细胞密度较为敏感，培养、传代时请注意保持细胞密度在合适的范围（具体请参考细胞说明书）。

7..该细胞冻存后复苏率较低，冻存时请酌情提高细胞量

8.通常情况下可以通过向正在生长的细胞中添加*培养基来维持细胞的生长，每7天可以将细胞离心并重悬于新配的培养基中，来完成细胞的全换液。

ATCC有关thp-1细胞保持细胞活力的说明

device=modal

（频繁的细胞计数是监测thp-1的最佳方法。这些细胞应该每2至3天通过向烧瓶中简单加入少量新鲜培养基（使它们具有条件培养基）来培养。您不需要每次都离心细胞并重新传代。当在我们的实验室中培养时，到第2天，细胞通常可以扩增到具有更多培养基的更大的烧瓶中。当细胞密度达到8×10 5个活细胞/ ml时需要进行传代。不允许细胞密度超过1×10（6）活细胞/ ml。）

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10�S的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

4）运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。

l 运输形式

低温:（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温: （2） T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

l 生物安全

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。