高效液相色谱仪(HPLC)是应用高效液相色谱原理，主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。储液器中的流动相被高压泵打入检测系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样本浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式输出检测结果。

　　高效液相色谱仪出现的故障是有哪些因素引起的

　　(一)保留时间变化

　　1.柱温变化 柱恒温，必要时需配置恒温箱

　　2.等度与梯度间未能充分平衡 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱

　　3.缓冲液容量不够用 》25mmol/L的缓冲液

　　4.柱污染 每天冲洗柱

　　5.柱内条件变化 稳定进样条件,调节流动相

　　6.柱快达到寿命 采用保护柱

　　(二)保留时间缩短

　　1.流速增加 检查泵,重新设定流速

　　2.样品超载 降低样品量

　　3.键合相流失 流动相pH值保持在3~7.5，检查柱的方向

　　4.流动相组成变化 防止流动相蒸发或沉淀

　　5.温度增加 柱恒温

　　(三)保留时间延长

　　1.流速下降 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡

　　2.硅胶柱上活性点变化 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱质钝化柱

　　3.键合相流失

　　4.流动相组成变化

　　5.温度降低

　　(四) 出现肩峰或分叉

　　1.样品体积过大 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%

　　2.样品溶剂过强 采用较弱的样品溶剂

　　3.柱塌陷或形成短路通道 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件

　　4.柱内烧结不锈钢失效 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品

　　5.进样器损坏 更换进样器转子

　　(五)鬼峰

　　1.进样阀残余峰 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗

　　2.样品中未知物 处理样品

　　3.柱未平衡 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)

　　4.每天新配,用抗氧化剂

　　5.水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水

　　(六) 基线噪声

　　1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压

　　2.污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂

　　3.检测器灯连续噪声 更换氘灯

　　4.电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)

　　5.检测器中有气泡 流动相脱气,加柱后背压

　　(七)峰拖尾

　　1.柱超载 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相

　　2.峰干扰 清洁样品,调整流动相

　　3.硅羟基作用 加三乙胺,用碱质钝化柱，增加缓冲液或盐的浓度，降低流动相pH值，钝化样品

　　4.死体积或柱外体积过大 连接点降至至低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管

　　5.柱效下降 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱

　　(八)峰展宽

　　1.进样体积过大

　　2.在进样阀中造成峰扩展 进样前后排出气泡以降低扩散

　　3.数据系统采样速率太慢 设定速率应是每峰大于10点

　　4.检测器时间常数过大 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%

　　5.流动相粘度过高 增加柱温,采用低粘度流动相

　　6.检测池体积过大 用小体积池,卸下热交换器

　　7.保留时间过长 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱

　　8.柱外体积过大 将连接管径和连接管长度降至最小

　　9.样品过载 进小浓度小体积样品