非蛋白质巯基含量检测试剂盒(微量法)
时间:2024-09-09 阅读:44
非蛋白质巯基含量检测试剂盒(微量法)
产品货号:BA1096
产品规格:100管/48样
产品简介:
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能,对生物体的自 我调节具有非常重要的生理意义。
巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在412nm处有吸收峰。
技术指标:
检出限:0.0061 μmol/mL
线性范围:0.00625-0.8 μmol/mL
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
产品内容:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液一 | 液体30mL×1瓶 | 2-8℃ |
提取液二 | 液体30mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂一 | 液体30mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃ |
标准品 | 粉剂×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制:
1. 提取液的配制:将提取液一和提取液二按体积比1:1的比例混合配制,按照样本数量配制并在当天用完;
2. 试剂二:临用前加入2mL无水甲醇充分溶解备用;
3. 标准品:10mg半胱氨酸,临用前加入1.65mL提取液溶解为50µmol/mL的半胱氨酸标准溶液。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、离心机、恒温水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、甲醇、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 动物、植物组织:称取约0.1g,加入1mL的提取液,制备成10%的匀浆,10000g,常温离心10min,取上清待测。
2. 细胞或细菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min)然后10000g,常温离心10min,取上清置冰上待测。
3. 血清(浆),培养液:向0.1mL血清(浆)或培养液中加入1mL提取液,10000g,常温离心10min,取上清待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零。
2. 标准品的制备:将50μmol/mL标准溶液用提取液稀释至0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μmol/mL的标准液,现用现配。
3. 操作表
对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 | |
上清液(μL) | 60 | 60 | - | - |
标准品(μL) | - | - | 60 | - |
试剂一(μL) | 130 | 130 | 130 | 130 |
试剂二(μL) | - | 20 | 20 | - |
H2O(μL) | 20 | - | - | 80 |
混匀,室温放置10min,吸取200μL于微量比色皿/96孔板中测定412nm吸光值,分别记为A对照、A测定、A标准、A空白,计算ΔA测定=A测定-A对照,算ΔA标准=A标准-A空白。 |
二、计算公式
1. 标准曲线的绘制:
以标准液浓度为x轴,ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA测定代入公式得到x(μmol/mL)。
2. 非蛋白质巯基含量计算:
(1)按样本质量计算
非蛋白质巯基含量(µmol/g 质量)=x×V提取÷W=x÷W
(2)按血清、培养液体积计算
非蛋白质巯基含量(µmol/mL)=x×(V提取+V液体)÷V液体=11×x
(3)按细胞数量计算
非蛋白质巯基含量(μmol/104cell)=x×V提取÷500=0.002×x
V提取:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g;Cpr,样本蛋白浓度,mg/mL;500:500万个细胞;V液体:血清(浆)或培养液体积,0.1mL。
注意事项:
1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
非蛋白质巯基含量检测试剂盒(微量法)
产品货号:BA1096
产品规格:100管/48样
产品简介:
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能,对生物体的自 我调节具有非常重要的生理意义。
巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在412nm处有吸收峰。
技术指标:
检出限:0.0061 μmol/mL
线性范围:0.00625-0.8 μmol/mL
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
产品内容:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液一 | 液体30mL×1瓶 | 2-8℃ |
提取液二 | 液体30mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂一 | 液体30mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃ |
标准品 | 粉剂×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制:
1. 提取液的配制:将提取液一和提取液二按体积比1:1的比例混合配制,按照样本数量配制并在当天用完;
2. 试剂二:临用前加入2mL无水甲醇充分溶解备用;
3. 标准品:10mg半胱氨酸,临用前加入1.65mL提取液溶解为50µmol/mL的半胱氨酸标准溶液。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、离心机、恒温水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、甲醇、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 动物、植物组织:称取约0.1g,加入1mL的提取液,制备成10%的匀浆,10000g,常温离心10min,取上清待测。
2. 细胞或细菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min)然后10000g,常温离心10min,取上清置冰上待测。
3. 血清(浆),培养液:向0.1mL血清(浆)或培养液中加入1mL提取液,10000g,常温离心10min,取上清待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零。
2. 标准品的制备:将50μmol/mL标准溶液用提取液稀释至0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μmol/mL的标准液,现用现配。
3. 操作表
对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 | |
上清液(μL) | 60 | 60 | - | - |
标准品(μL) | - | - | 60 | - |
试剂一(μL) | 130 | 130 | 130 | 130 |
试剂二(μL) | - | 20 | 20 | - |
H2O(μL) | 20 | - | - | 80 |
混匀,室温放置10min,吸取200μL于微量比色皿/96孔板中测定412nm吸光值,分别记为A对照、A测定、A标准、A空白,计算ΔA测定=A测定-A对照,算ΔA标准=A标准-A空白。 |
二、计算公式
1. 标准曲线的绘制:
以标准液浓度为x轴,ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA测定代入公式得到x(μmol/mL)。
2. 非蛋白质巯基含量计算:
(1)按样本质量计算
非蛋白质巯基含量(µmol/g 质量)=x×V提取÷W=x÷W
(2)按血清、培养液体积计算
非蛋白质巯基含量(µmol/mL)=x×(V提取+V液体)÷V液体=11×x
(3)按细胞数量计算
非蛋白质巯基含量(μmol/104cell)=x×V提取÷500=0.002×x
V提取:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g;Cpr,样本蛋白浓度,mg/mL;500:500万个细胞;V液体:血清(浆)或培养液体积,0.1mL。
注意事项:
1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。