谷氨酸(Glu)含量检测试剂盒(微量法)
时间:2024-09-23 阅读:39
谷氨酸(Glu)含量检测试剂盒(微量法)
产品货号:BA1126
产品规格:100管/96样
产品简介:
Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源之一。此外,Glu还是味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生产。
谷氨酸脱氢酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+,引起340nm处吸光度的上升,通过测定340nm吸光度的变化,计算谷氨酸含量。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
产品内容:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体60mL×2瓶 | 2-8℃ |
试剂二 | 液体2mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂三 | 粉剂×1瓶 | -20℃ |
试剂四 | 粉剂×1支 | -20℃ |
标准液 | 液体0.5mL×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制:
1. 试剂三:临用前加入20mL试剂一;
2. 试剂四:临用前加入1.5mL试剂二;
3. 标准液:10μmol/mL谷氨酸标准品。
技术指标:
检出限:0.0037μmol/mL
线性范围:0.0125-0.2μmol/mL
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵、冰、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
细菌、细胞或组织样品:收集细胞或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次),10000rpm,常温离心10min,取上清待测。
称取约0.1g组织,加入1mL试剂一进行冰浴匀浆,10000rpm,常温离心10min,取上清待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2. 标准溶液的制备 :将标准品分别稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125μmol/mL的标准溶液。
3. 在有盖EP管中加入下列试剂:
(1)标准管:在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL标准溶液、160μL试剂三和10μL试剂四混匀,立即记录 340nm处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2,计算∆A=A2-A1。
(2)测定管:在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL样本、160μL试剂三和10μL试剂四混匀,立即记录340nm 处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2,计算∆A=A2-A1。
三、谷氨酸含量计算:
1. 标准曲线的绘制:
以谷氨酸含量(µmol/mL)为x轴,标准管∆A为y轴,绘制标准曲线y=kx+b。将测定管∆A带入方程得到x值(µmol/mL)。
2. 氨基酸含量计算:
(1)按照蛋白浓度计算:谷氨酸含量(µmol/mg)=x×V样本÷(Cpr×V样本)=x÷Cpr
(2)按照样品鲜重计算:谷氨酸含量(µmol/g 质量)=x×V样本÷(W÷V样总×V样本)=x÷W
(3)按照细菌或细胞数量计算:谷氨酸含量(μmol/104 cell)=x×V样本÷(1000÷V样总×V样本)=0.001x。
V样总:加入提取液体积,1mL;V样本:加入的样本体积,0.04mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;1000:细菌或细胞总数,1000万。
注意事项:
如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
谷氨酸(Glu)含量检测试剂盒(微量法)
产品货号:BA1126
产品规格:100管/96样
产品简介:
Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源之一。此外,Glu还是味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生产。
谷氨酸脱氢酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+,引起340nm处吸光度的上升,通过测定340nm吸光度的变化,计算谷氨酸含量。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
产品内容:
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体60mL×2瓶 | 2-8℃ |
试剂二 | 液体2mL×1瓶 | 2-8℃ |
试剂三 | 粉剂×1瓶 | -20℃ |
试剂四 | 粉剂×1支 | -20℃ |
标准液 | 液体0.5mL×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制:
1. 试剂三:临用前加入20mL试剂一;
2. 试剂四:临用前加入1.5mL试剂二;
3. 标准液:10μmol/mL谷氨酸标准品。
技术指标:
检出限:0.0037μmol/mL
线性范围:0.0125-0.2μmol/mL
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵、冰、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
细菌、细胞或组织样品:收集细胞或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次),10000rpm,常温离心10min,取上清待测。
称取约0.1g组织,加入1mL试剂一进行冰浴匀浆,10000rpm,常温离心10min,取上清待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2. 标准溶液的制备 :将标准品分别稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125μmol/mL的标准溶液。
3. 在有盖EP管中加入下列试剂:
(1)标准管:在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL标准溶液、160μL试剂三和10μL试剂四混匀,立即记录 340nm处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2,计算∆A=A2-A1。
(2)测定管:在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL样本、160μL试剂三和10μL试剂四混匀,立即记录340nm 处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2,计算∆A=A2-A1。
三、谷氨酸含量计算:
1. 标准曲线的绘制:
以谷氨酸含量(µmol/mL)为x轴,标准管∆A为y轴,绘制标准曲线y=kx+b。将测定管∆A带入方程得到x值(µmol/mL)。
2. 氨基酸含量计算:
(1)按照蛋白浓度计算:谷氨酸含量(µmol/mg)=x×V样本÷(Cpr×V样本)=x÷Cpr
(2)按照样品鲜重计算:谷氨酸含量(µmol/g 质量)=x×V样本÷(W÷V样总×V样本)=x÷W
(3)按照细菌或细胞数量计算:谷氨酸含量(μmol/104 cell)=x×V样本÷(1000÷V样总×V样本)=0.001x。
V样总:加入提取液体积,1mL;V样本:加入的样本体积,0.04mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;1000:细菌或细胞总数,1000万。
注意事项:
如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。