微丝染色液(R250 法)
 

　　产品货号：R21851
 

　　产品规格：5×50ml
 

　　产品简介： 细胞骨架一般是指真核细胞胞质中纵横交错的纤维网，观察细胞骨架的方法有电镜、组织化学、酶标记、免 疫荧光等。微丝(microfilament)是由肌动蛋白构成的纤维，微丝在不同种类的细胞中与某些结合蛋白一起形成不 同的亚细胞结构(如肌肉细丝、肠上皮微绒毛轴心、应力纤维等)。 尚宝生物微丝染色液(R250 法)主要显示由微丝构成的应力纤维，由于细胞对细胞基质的附着和维持扁平铺展 的形状，该纤维在体外培养的贴壁细胞中尤其发达。考马斯亮蓝 R250 染色微丝并非特异性的，因为 R250 可以 对多种蛋白质染色。尚宝生物生产的微丝染色液在染色过程中由于微观结构不稳定，有些纤维在光学显微镜下无 法辨认，因此能够看到的纤维主要是由微丝组成的应力纤维。本试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他 用途。 产品组成： 产品名称 5×50ml 储存条件 试剂(A): PBS buffer(10×) 50ml 室温 试剂(B): TM buffer 50ml 室温 试剂(C): M buffer(3×) 50ml 室温 试剂(D): Microfilament fluid 50ml 4℃，避光 试剂(E): R250staining solution 50ml 室温
 

　　操作步骤： (一)、动物细胞微丝 1. 取材：在盖玻片上细胞培养，生长密度达 60～70%时细胞面朝上置于称量瓶中。用去离子水稀释 PBS buffer(10 ×)至 1×，用 1×PBS buffer 清洗 1min，重复 1 次。 2. 抽提：弃 PBS buffer，加入 2ml TM buffer，盖上称量瓶盖子，37℃处理 25～30min。 3. 漂洗：弃 TM buffer，用去离子水稀释 M buffer(3×)至 1×，用 1×M buffer 清洗 2min，重复 2 次。 4. 固定：稍微晾干，加入 2ml Microfilament fluid，固定细胞 15～20min。 5. 冲洗：弃 Microfilament fluid，用 1×PBS buffer 轻轻清洗 2min，重复 1 次。 6. 染色：弃 PBS buffer，把盖玻片立于吸水滤纸上吸去边缘水分，加入 2ml R250 staining solution，染色 20～ 25min。 7. 去离子水冲洗染液，滤纸吸干水分，晾干，镜检或树脂封片。 (二)、植物细胞微丝 1. 取材：用去离子水稀释 PBS buffer(10×)至 1×。轻轻撕取约 1cm 洋葱鳞茎内皮，置于预先加入 1×PBS buffer 的称量瓶中，孵育 5～10min，使其下沉。 2. 抽提：弃 PBS buffer，加入 2ml TM buffer，盖上称量瓶盖子，37℃处理 30min。 3. 漂洗：弃 TM buffer，用去离子水稀释 M buffer(3×)至 1×，用 1×M buffer 清洗 3～5min，重复 2 次。 4. 固定：稍微晾干，加入 2ml Microfilament fluid，固定细胞 20～25min。 5. 冲洗：弃 Microfilament fluid，用 1×M buffer 清洗 3～5min，重复 2 次。