4CN显色试剂盒（HRP显色）

产品货号：T15230

产品规格：100ml/500ml

产品简介：

4CN是4-氯-1-萘酚的缩写，属于辣根过氧化物酶(HRP)发色系统，与DAB、TMB显色原理类似。

4CN显色试剂盒(HRP发色)其显色原理是4CN与氧化物形成紫色沉淀，可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可用于Western等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。

产品组成：

自备材料：

1. 洗涤液

2. 蒸馏水

操作步骤（仅供参考）：

1. 常规组织切片、细胞样品、膜与辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤。对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也可用洗涤液洗涤。

2. 按4CN显色液：4CN氧化剂=比例混合,即为4CN显色工作液，即配即用。

3. 洗涤过组织后，去除洗涤液，加入适量4CN显色工作液，确保覆盖样品。

4. 室温避光孵育30min或更长时间，直至显色至预期深浅。

5. 去除4CN显色工作液，用蒸馏水清洗即可终止显色反应。

6. 对组织切片或细胞样品，反应终止后，如有必要可用中性红染色液染色，便于观察。对于膜染色，反终止后可室温晾干避光保存。

注意事项：

1. 4CN氧化剂易挥发，应密闭保存。

2. 显色后易褪色，请注意避光，以减少染料分解。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题及可能原因：

1. 背景显色太深

①在免疫组化时如果背景显色太深，考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。也应请注意选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。

②在进行含内源性过氧化氢酶的免疫组化时，如果背景显色太深，需注意灭活内源性过氧化氢酶。可以在4体积甲醇中加入1体积3%过氧化氢，混匀后用于内源性过氧化氢酶的灭活。

③可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。

④选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间。

2. 没有显色或显色太弱

①当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在膜上，检测二抗是否可以被正常显色。

②考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。

③适当延长显色时间，另外确定抗原修复是否对于使用的一抗是必需的。

有效期：6个月有效。