1.把要做的切片先分好，做几个抗体可分几盒，不正常组织与正常组织要分开。其余做预实验用。 

2.选择实验要做的抗体时，要结合他们的正常组织和癌组织的分别表达率。

3.试剂盒的选择可结合生物素强弱的情况。如：肝组织生物素含量高，S-P 试剂盒生物素含量也高，故不能配合使用。 

4.每次开始做时，都必须先清点实验的必需品是否齐全。想好可能发生的意外，并先想好补救措施。当抗体不够用的情况下，原先买的抗体最好不要用完，留做可能需要的验证试验。新的抗体要尽量同公司，同批号。

5.烤片（单一或综合）程度要适情况而定，可中途拿出甩一甩，尽可能先放在烤箱里烤 3 小时以上。切勿把片烤得太久了。程度刚好，脱蜡效果才会好。注意做好不同条件的切片标记。注意温度稳定，再烤片。 

6.二甲苯脱蜡。温度过低时，可先把二甲苯整罐放进烤箱加热，或者可把片放在二甲苯里一起加热脱蜡，这样效果会更好；若温度适宜，那还是在室温下脱蜡，要不可能会适得其反。时间也是适情况而定。

7.高压修复时，要注意稀释比例，修复液的种类（EDTA 不可以重新进行利用，可能发生交叉作用），PH 值等。高压锅内压力未降至正常时不可打开，压力正常后可多放会儿，能更好的利用余压，把握程度。若是多次修复，每次都需先把锅内热水倒掉，换冷水，保证条件的可重复性。 

8.抗体反复冻融可使效价降低。抗体要防止污染。不可用塑料保存，塑料可吸附抗体。抗体稀释：应遵循“现用现配”的原则，对于 PBS（其他稀释液，注意 PH 值，PBS 为偏中碱性）稀释的抗体最好要当天使用。稀释比例恰好为佳，注意前带和后带效应。

9.吹干封片时不能有泡泡。若是没封好，可进行二甲苯、酒精脱树胶，吹干再次封片，但镜下效果会明显变差。因而，若没必要，最好不要再次脱胶。DAB 显色需用中性树胶封片，AEC （易溶于有机溶剂）需用水性胶封片。 

10.刚封完的载玻片会移动，故切片还没干时，尽量不要碰到盖玻片，可避免树胶溢出，片的整体效果不好。

附录：临床上常用免疫组化指标 

通常恶性肿瘤，免疫组化耐药预后标记（共 4 个 marker）为：P-gp，GSTπ，TOPOII，Ki-67。而乳腺癌免疫组化耐药预后标记（共 7 个 marker）为：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67，ER， PR，C-erbB-2。