这篇文章Kaustubh Kishor Jadhav撰写的，今天接着把续集写完，划重点，续集真的很重要，因为都是满满告诉您怎么对付和清除支原体的干货。

避免支原体感染的最好和最重要的方法是为实验室工作人员提供适当的培训和指导。这可以通过培训合格的员工进行细胞培养，从而消除污染的原因之一。如果可能的话，应该为细胞培养和细胞系的维持提供一个单独的实验室。为实验室提供这样的环境不仅可以减少支原体，而且可以避免其他细菌和真菌污染。

合适的个人防护用品很重要

由于人类是污染的主要来源，预防步骤从你开始。如果你足够小心地为工作提供一个无菌的环境，它很快就会在你意识到之前成为一种习惯。这里有一些事情要做： 

1.在处理细胞系时，穿上干净的实验服和面罩。

2.避免与其他实验室成员讨论，在实验室打喷嚏或咳嗽。人类口腔中含有多种支原体，当你说话、大笑、打喷嚏或咳嗽时，这些支原体会进入细胞培养。

3.工作时戴手套，使用后丢弃。在没有手套或口罩的情况下工作时，人与人接触会传播污染。一定要定期更换手套和口罩，而不是把它们放在实验服的口袋里。

4.为实验室准备单独的鞋子，以避免带入环境污染物。

细胞系和试剂

5.使用前检查你的细胞株有无支原体污染。

6.确保用于继代培养的血清中没有污染。避免使用存放时间较长的过期产品或试剂。

7.尽可能使用新鲜培养基和密封紧密的试剂耗材。

8.使用一次性移液管以避免交叉污染。

9.在工作之前和工作期间，确保将所有必需的设备和试剂放在层流气流中。

10.在使用细胞系进行化验或分析之前，进行支原体污染的常规检查。

11.使用0.1微米的过滤器，因为他们是一个更好的方式避免支原体，而不是使用0.2微米的过滤器，为媒体过滤。虽然不能100分之100保证这个过程可以避免污染，但这是一个很好的预防措施。

12.准备少量用于实验的培养基，防止其他培养基受到污染。

13.避免细胞培养物长时间暴露在空气中，并确保在将其放入培养箱之前拧紧瓶盖。这也将解决通过气溶胶污染的问题。

14.在不使用抗生素的情况下进行培养，因为使用抗生素会使支原体对抗生素产生耐药性。抗生素只能用于去除支原体，不能用于防止支原体生长。此外，长时间使用某种抗生素会导致除支原体外的其他细菌产生耐药性。

15.即使冷冻保存细胞的存活率随着每一次继代培养而降低，也要始终以冷冻保存的小瓶的形式保存细胞系。

定期对层流设备和实验室设备进行熏蒸

用于维持细胞系的CO2培养箱不得过度拥挤（填充量不得超过其容量的60%），否则会导致支原体从一个细胞系感染到另一个细胞系。

多个细胞系不应存放在一个培养箱中，因为它会增加交叉污染的风险。

应定期清洁CO2培养箱，避免任何形式的潮湿。为保持湿度而提供的蒸馏水应该定期更换，因为支原体、细菌和真菌可以在这些容器中居住。

立即清理所有溢出的培养基和试剂。

水浴、液氮容器、试剂瓶和其他传染源必须定期清洁，并定期检查是否有污染。

那么你发现了支原体污染，接下来怎么办？最（嘬）好的方法是丢弃被感染的细胞培养瓶。在文化不可替代或非常昂贵的情况下，有一些方法可以拯救文化。

消除是一个非常耗时的过程，并增加了对其他健康细胞系的二次污染风险。支原体清除剂（MRA）是喹诺酮类抗生素的衍生物，是广谱抗生素。这些试剂可以用来清洗细胞培养物。根据感染的严重程度，治疗可能需要几周到几个月。浆细胞素是一种广泛应用的药物，可以清除培养基中存在的大多数支原体。此外，诸如BM-Cyclin、氟喹诺酮类环丙沙星、环丙沙星、zagam、baytril、四环素等药物可用于从感染培养物中去除支原体。

MRAs无毒，能有效去除大部分支原体污染，使用方便，对多种支原体有效。这些方法不能保证*去除支原体，但可以去除大部分支原体污染，是最后的选择。考虑到这种治疗的持续时间会影响细胞的生长和活力，因此存在一些缺点。如果支原体对细胞培养造成了永（咏）久性的损害，那是不可修复的。一些细胞可能会由于较长的潜伏期而死亡，并影响细胞的总活力。