BV2细胞异常生长形态解析及解决方案
时间：2022-01-06 阅读：4139
BV2
常用的小胶质细胞模型，它用携带v-raf/v-myc基因的逆转录病毒（J2）感染原代小胶质细胞而获得永生化。BV2细胞表达非特异性酯酶活性，它具有吞噬性能力，并缺乏过氧化物酶活性。这种细胞不仅会分泌溶菌酶，在适当的刺激下，还会分泌白细胞介素1和肿瘤坏死因子。
此外，BV2细胞还表现出自发的抗念珠菌活性，用干扰素-Y处理后获得杀肿瘤活性。
从表型上看，BV2细胞对MAC1和MAC2抗原呈阳性，而对MAC3、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和半乳糖核苷（GC）抗原呈阴性[1]。
图A. BV2细胞显微照片，bar=30 μm.
图B. 通过扫描电镜观察，在玻璃盖板上培养的BV2细胞，bar=5 μm.
图C. 通过透射电镜观察，BV2细胞的部分细胞质吞噬iCA，bar=3 μm.
（图片引用自文献[1]）
在培养BV2细胞的时候，同学们最常遇到的问题就是生长形态异常。生长形态异常往往伴随着细胞生长缓慢、细胞死亡等，导致实验做不出结果，给大家带来重重困扰。
小普根据多年的实验经验，为大家整理了这一现象可能发生的原因，及相应解决方案。
首先我们来看看正常的BV2形态。结合众多文献和Procell的细胞图片来看，BV2是一种半贴壁半悬浮细胞，它的形态并不规则，存在圆形和梭形两种。
悬浮细胞为圆形，贴壁细胞既有圆形也有梭形。由于圆形细胞折光率高，它的边缘看起来是发亮的；梭形细胞则向两端伸出黑色突起。
（图片源自Procell）
那么，异常生长的BV2细胞有哪些形态呢？
如何根据不同的异常生长形态，调整改善培养条件，及时解决问题？
小普总结如下：
形态1：细胞全部飘起，*不贴壁
解析：分为培养基偏碱及复苏后不贴壁两种情况。
（1）培养基偏碱。培养瓶不透气或者开封时间过长，培养基PH将增大，可见培养基呈紫红色。BV2对培养基酸碱度较为敏感，在偏碱培养基中培养数小时后将会全部飘起。
解决方案：给细胞换上新鲜配制的培养基，并使用透气瓶。
（2）复苏后不贴壁。需要检查冻存或复苏操作过程，以及培养基是否存在问题。
解决方案：确保冻存前状态良好及冻存复苏操作规范，使用新鲜配制的培养基，即可解决问题。
形态2：细胞形态变为阿米巴样
解析：小胶质细胞是一种可塑性*的细胞，可通过特定因素激活，从而发挥其免疫功能。从静息态变为激活态的过程中，小胶质细胞形态也随之发生改变。
实验中常用细菌脂多糖（LPS）和干扰素-γ（IFNγ），分别模拟细菌和病毒感染，来刺激小胶质细胞激活。受到刺激的小胶质细胞突起缩短变厚，胞体增大，呈现阿米巴样（如下图所示）。
但有的时候BV2形态变化并不明显，还需要结合其他实验，如检测NO、IL-13等炎症因子的表达，来确定BV2是否被定向激活。
（图片引用自文献[2]）
如果细胞没有受到任何刺激，就已经呈现阿米巴样，或者受刺激后，炎症因子表达没有差异，那么细胞有可能发生了自分化。
其原因可以从以下几点考虑：
（1）存在潜在微生物污染，刺激细胞自分化。
解决方案：通过去掉培养基中的抗生素确定污染类型，并排查污染源头。
（2）使用的胎牛血清内毒素高，内毒素刺激细胞自分化。
解决方案：尝试使用超低内毒素胎牛血清，或许能得到改善。
形态3：全都是分枝状细胞，圆形细胞少
解析：这种形态往往伴随着细胞生长慢或生长停滞的情况。由于圆形细胞增殖速度较快，在圆形细胞缺失的状况下，整体增殖速度就会减慢。
解决方案：由于BV2是一种半贴壁半悬浮细胞，贴壁和悬浮细胞的比例并不固定，当悬浮细胞较多时，换液和传代时要将悬浮细胞收集，避免圆形细胞的大量损失。
总而言之，BV2细胞的形态、生长状态与其生长环境息息相关，给细胞以最合适的环境，严格按照要求规范操作，细胞也将用好的状态回报你。
参考文献：
[1] PubMed=2110186; DOI=10.1016/0165-5728(90)90073-V.
Blasi E., Barluzzi R., Bocchini V., Mazzolla R., Bistoni F.
Immortalization of murine microglial cells by a v-raf/v-myc carrying retrovirus.
J. Neuroimmunol. 27:229-237(1990)
[2] PMID=31590042 ; DOI=10.1016/j.molimm.2019.09.020.
Zhang J, Zheng Y, Luo Y, Du Y, Zhang X, Fu J.
Curcumin inhibits LPS-induced neuroinflammation by promoting microglial M2 polarization via TREM2/ TLR4/ NF-κB pathways in BV2 cells.
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