• 总有一种转染方法适合你

  
  

一、

怎样提高细胞的转染效率?有的同学做了转染，连接目的基因的载体带荧光，转染后48小时在荧光显微镜下观察，却发现只有约百分之15左右的荧光，问该怎么提高转染效率?有没有必要接着往下做筛选?还是重新转染一次?

1、

如果要是做稳定筛选的话，15%的转染率应该够了。

提高转染效率的话，可以适当降低转染时细胞的密度(我试过60～70%的密度比90%更好一些)，另外还有可能就是细胞的生长状态，还有在接种后24h内进行转染。

2、

转染应该在对数生长期内进行才能保证转染效率，因为该时期细胞生长状态良好，容易吸收外源质粒，而不同细胞株的对数生长期是有差异的，因此建议先绘制培养细胞的生长曲线、确定其对数生长期，然后再着手做转染。

二、

有同学用293细胞包装病毒，转染有荧光(约百分之二十)，但是感染总是没有荧光，感染细胞状态很好，第四天后开始变圆脱落。转染后的细胞没有抗性，不能筛。

1、

20%的转染率太低了，一般用293T包装慢病毒转染率达到80%以上.转染率太低和293T的代数有关系，还和质粒的浓度和纯度有关系。

2、

转染的前一天将细胞传代，根据你的细胞生长速度，传成适当的密度，保证第二天细胞达到70%左右，做转染。有的人用脂质体转染，由于脂质体对细胞有毒性作用，细胞特别容易脱落，所以防止细胞脱落，是提高转染效率的关键。

3、

转染的效率根本上还是由细胞种类决定的，有些细胞系好转，效率高，有些就不怎么好了。但是我们还是可以尽可能的提高转染效率，之前提过，细胞生长状态要好，这个很重要。另外，每种细胞系都有自己的最好用的转染试剂，要多看文献知道这种细胞系用哪种转染试剂最多。然后自己可以按照DNA和转染试剂的比例做个曲线，看看reporter的表达效率，做到好的转染效率。其实DNA的质量也很重要，不仅仅是内毒素影响细胞的生存，一般情况下DNA超螺旋最好比列越高越好。为了促进表达，转染前线性化也可以。

如果有些细胞系确实难转，就应该考虑其他方法了，电穿，病毒之类的。amaxa的nucleofector可以直接把质粒打到核里，很好用。

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