培养细胞最担心的就是细胞污染，这期继续分享如何辨别细胞污染的经验。

★识别支原体污染

这是一种很难发现却经常存在的问题。

• 支原体是最小的（0.3 μm）能够自我复制的有机体，倒置显微镜下通常观察不到。

• 支原体没有细胞壁，对常用的抗生素不敏感。支原体感染是极为不易察觉的，可能直到出现了可以观察到的病变或发现细胞正常功能丧失的时候，才意识到是发生了支原体感染。

• 在没有采用特殊的染色方法，也没有观察到病变的情况下，实验总是不成功，就应怀疑被支原体污染。预防支原体污染的惟-途径是经常对细胞进行筛选。

   

★防止支原体感染

• 只使用那些证明没有污染支原体的血清和培养基。

• 只接受那些保证没有支原体感染的细胞。

注意：当你怎么样也得不到一种细胞表面蛋白的抗体，或不能有效地表达某种蛋白质时，可能是由于使用了被支原体感染的细胞。

★检测支原体感染

如果这株细胞对你十分重要，那么就应该每4~6周对细胞进行检测，通常使用下面几种方法：

●支原体的荧光染色是简单、便宜也是常用的方法。

●使用支原体的特异引物进行PCR检测。如果实验室具备PCR仪和电泳条件，那么这种方法可能是尤为简单的手段。可以自己设计引物（设计好恰当的对照），也可以从公司购买引物。

●把细胞样品送到能进行支原体检测的公司检测。这样做虽不如自己检测快（尽管托给公司比较容易，但会很贵），只有一个好处就算是不用自己亲自动手。

注意：如果你发现了支原体污染

●合适的方法是立即把细胞丢弃，从新复苏。

●可以不理会它。

●可以采取某些挽救措施，但是会很困难，只适用于那些不可代替的细胞。简单的方法是订购除去支原体的试剂盒。

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