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细胞结构中的神奇细胞器：脂滴

时间：2024-01-30 阅读：911

今天我们要来聊一下细胞结构里面的一个神秘小东西-脂滴

没错没错，你没看错！这就是那些小小的圆圆的、像是浸泡在脂肪里的小球球！它们的外观看起来就像是脂肪掉进了细胞里，而且它们还有着各种神奇的功能。

那么，脂滴到底是什么呢？它们是由一种叫做“脂质”的化学物质组成的。脂滴是脂质和能力稳态中心的储存细胞器。它们具有不一样的结构，由中性脂质的疏水核心组成，该核心由磷脂单层包围，磷脂单层由一组特定的蛋白质修饰。脂质本质上就是脂肪酸和甘油的混合物，它们在细胞里的主要功能就是作为能量储备。

脂滴不仅仅是细胞内的能量储备库，它们还可以帮助细胞进行重要的功能。如蛋白质降解、隔离转录因子和染色质成分以及为某些核受体生成脂质配体。此外，病毒核衣壳蛋白核心本身可与脂滴表面结合并协调病毒感染的持续传播。它们可以帮助调节细胞内的代谢过程，帮助细胞在不同的生理状态下更好地运作。此外，脂滴还可以作为一种储存信号分子的地方，这些信号分子可以在需要的时候释放出来，帮助细胞完成一些复杂的生化反应。

脂滴看起来很小，但它们在细胞内的重要性不可小觑。当人体内能量供应充足的时候，脂滴会不断地增加，以储备能量；而当人体需要能量的时候，脂滴又会迅速地释放出来，为身体提供能量支持。

那么，脂滴在我们的身体里面到底长什么样呢？其实，它们的外观有点像一个个小圆球，通常都位于细胞的中央区域，但也会分布在整个细胞内。如果你有看过一些细胞结构的图像的话，你会发现，脂滴通常会在图像上显示成一个个小点点，而且数量通常也很多。小小脂滴如何检测呢？

1. C11 BODIPY 581/591

C11 BODIPY 581/591 (Catalog No.: GC40165) 是一种 BODIPY 氟硼荧衍生物，具有良好的光稳定性、低荧光伪影特质。C11 BODIPY 581/591 常用于活细胞内脂质过氧化比率和抗氧化性能的研究，或与羟基自由基反应、检测铁死亡 (ferroptosis)。C11 BODIPY 581/591 发射波长为 591 nm (还原型)，或红移至 510 nm (氧化型)；激发波长分别为 581 nm (还原型)、500 nm (氧化型)。

1. 细胞制备：

悬浮细胞：离心收集细胞，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。

贴壁细胞：弃去培养基，加入胰蛋白酶消化细胞。离心弃去上清后，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。

2. 加入 1 mL C11 BODIPY 581/591 工作液，室温孵育 15 分钟。

3. 400 g，4℃ 离心 3-4 分钟，弃去上清。

4. 加入 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。

5. 用荧光显微镜拍照，设置氧化型的激发光和发射光分别为460–495nm 和 510–550nm。还原型激发光和发射光分别为565–581nm和 585–591nm。

2. BODIPY 493/503

BODIPY 493/503 (Catalog No.: GC42959) 是一种亲脂性荧光染料，发出亮绿色荧光，已广泛用于脂质滴标记（Ex/Em:493/503 nm）。BODIPY 493/503与荧光、共焦和双光子显微镜以及流式细胞仪兼容，可用于活细胞和固定细胞。

1. 在与研究相关的培养条件下培养细胞。（例如，35 mm 孔中有 50,000 个 A498 细胞。）

注意：细胞与 30 μM 油酸一起孵育过夜可作为增加中性脂质含量的阳性对照，因为油酸是甘油三酯合成和储存的有效诱导剂。不含脂肪酸的 BSA 作为对照。

2. 在感兴趣的时间点，在 PBS 中制备 2 μM BODIPY 493/503 染色溶液。

3. 使用 3 ml PBS 快速漂洗细胞以去除培养基/血清。

4. 在 BODIPY 493/503 染色液中于 37 °C 避光孵育 15 分钟。包括用于流式细胞术的未染色控制。

5. 使用 3 ml PBS 快速漂洗细胞以去除染色液。

6. 用胰蛋白酶消化细胞以产生单细胞悬液。对于本协议中使用的 A498 细胞系，细胞在 37°C 下与胰蛋白酶-EDTA（0.25%）孵育 5 分钟。

7. 加入 5 ml PBS 并将细胞悬液转移到 15 ml 锥形管中。

8. 以 250×g、5 分钟、4 °C 沉淀细胞。

9. 吸出上清液，用 3 ml PBS 快速漂洗细胞沉淀，并以 250 × g，5 分钟，4 °C 沉淀细胞。

10. 小心吸出上清液并在 300 μl 1x 流式细胞术缓冲液中重悬细胞。

11. 将细胞悬液通过 35 μm 过滤器放入 FACS 管中。

12. 进行流式细胞术。每个条件至少获得 10,000 个事件。

13. 将数据分析为平均荧光或将数据显示为直方图。

3. Oil Red O

油红 O （Catalog No.:GC25676）是一种溶血色素（脂溶性染料）重氮染料，用于冷冻切片上的中性甘油三酯和脂质以及石蜡切片上的一些脂蛋白的染色。它具有红色粉末的外观，最大吸光度为 518 纳米。

1. 制备储存液

0.1 g 油红 O 溶于 20 mL 丙二醇。

2.细胞染色

2.1 将冷冻切片的组织载玻片风干并用 4% 多聚甲醛固定。

2.2在室温下用油红 O 溶液染色 30 分钟。

2.3 用蒸馏水冲洗 10 分钟。

2.4 载玻片用明矾苏木精轻轻染色 1 分钟。

2.5用蒸馏水冲洗，并安装用于显微镜检查。

4. 其他脂滴荧光探针

Cat.No.	Product Name	Information
GC42964	BODIPY-Cholesterol	BODIPY-cholesterol is a biologically active and cel-permeable analog of cholesterol that is tagged with a fluorescent BODIPY group at carbon 24.
GC42249	3-BODIPY-propanoylaminocaproic Acid N-hydroxysuccinimide ester	3-BODIPY-propanoylaminocaproic acid N-hydroxysuccinimide ester (BODIPY FL-X SE) is an amine-reactivefluorescent probe.
GC44574	PBD-BODIPY	PBD-BODIPY is a probe for the spectrophotometric measurement of autoxidation reactions.
GC42960	BODIPY 505/515	BODIPY 505/515, a lipophilic fluorescence dye, emits fluorescence has been used extensively for lipid droplet labeling (Ex/Em: 505/515 nm).
GC42963	BODIPY-C12 Ceramide (d18:1/12:0)	BODIPY-C12 Ceramide (B12Cer) is a fluorescently-tagged form of C12 ceramide that displays excitation/emission maxima of 505/540 nm, respectively.
GC42962	BODIPY 630/650X succinimide ester	BODIPY 630/650X succinimide ester is a fluorescent conjugate of the adenosine receptor ligand N-ethylcarboxamido-adenosine (NECA).
GC42959	BODIPY 493/503	BODIPY 493/503, a lipophilic fluorescence dye, emits bright green fluorescence has been used extensively for lipid droplet labeling (Ex/Em: 493/503 nm).
GC40165	C11 BODIPY 581/591	C11-BODIPY581/591 is a fluorescent ratio-probe of lipid oxidation.
GC42961	BODIPY 558/568 C12	BODIPY 558/568 C12 is a fatty acid-conjugated fluorescent probe for lipid droplets.

所以，小伙伴们，现在你们已经知道了脂滴是什么了，它们是细胞内的重要组成部分，不仅仅是能量储备库，还能帮助细胞完成很多生物学功能。是不是觉得很神奇呢？赶快去看看你身边的细胞，是不是也有一些小小的圆圆的小球球在里面跳。

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