实验原理：

琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。

DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。

DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。

实验步骤：

1. 配胶 首先根据DNA片段大小确定琼脂糖凝胶浓度，称取相应质量的琼脂糖粉末于TAE/TBE缓冲液中溶解，微波加热1min左右取出（时间根据体积改变），加入Gelred染料，摇晃均匀后倒入模具。

注：缓冲液为三乙酰-乙二胺四乙酸（EDTA）（TAE）或三硼酸-EDTA（TBE），三酸溶液是微碱性条件下的有效缓冲液，可保持DNA去质子化并溶于水。EDTA是一种螯合剂，能使可能损害被分析的DNA的核酸酶失活。

表1 DNA片段大小与琼脂糖凝胶浓度的关系

2、凝胶浇注

选择所需尺寸的凝胶浇注模具和梳齿。轻柔地将加了染料的琼脂糖凝胶溶液倒入模具中，观察有无气泡产生，在胶未全部凝固的时候戳破，否则会影响最终结果。注：速度不可太快，否则容易出现气泡。

3、将样品与DNA loading buffer混合

将样品与含溴酚蓝的loading buffer混合，loading buffer可以帮助我们观察样品的位置。

4、凝胶装入

待胶变硬，直到呈乳白色且不透明（约20-30 min），小心地垂直拔出梳齿，将胶块放入电泳槽中，确保孔位于负电极（一般为黑色），将运行缓冲液（TAE或TBE）注入槽中，使凝胶被淹没1-2 mm。用移液器向泳道中加样，不要超过泳道载量，否则样品会溢出。

5、凝胶运行

确保电极没有插反，否则样品会跑到缓冲液中。设定凝胶运行的时间和电压，调节电压至4-5V/cm，DNA从负极移到正极，电泳时间30-60 min，具体根据凝胶比例和片段大小进行调整（一般120V，35 min即可）。电泳结束后，拔掉电源。

常见问题分析：

1.加样孔有荧光

（1）提DNA时有蛋白质残留。

（2）基因组DNA，如果使用普通的琼脂糖电泳，往往不能电泳出孔，滞留在加样孔中产生荧光。

2.条带扭曲呈波浪状

（1）配制凝胶的缓冲液和电泳缓冲液不是同时配制的。

（2）电泳时电压过高。可以在电泳前15分钟用较低电压（3 V/cm），等条带出孔后，再调电压。

（3）慢慢加样，等样品自然沉降后再加电压。

3.条带弥散

（1）DNA发生降解。

（2）电泳缓冲液陈旧（根据DNA Maker对照，观察是否为电泳体系的问题）。

（3）PCR过程产生非特异性的扩增 （使用特异性较高的引物）。

以上就是本期的内容，更多资讯，欢迎点击安培生物网站链接了解更多技术与产品资讯。

安培生物致力成为推动生命科学进步值得信赖的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技术实力、先进的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业。总部设在广东，服务面向全国。安培生物集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司，旨在为生命科学的发展提供较好的产品与服务。本公司建立了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、信号传导和神经科学等领域的产品供应线，在各个领域内向用户提供较高的水平和质量稳定的产品，安培生物致力于为广大的科研机构、高等院校等客户提供各种产品、技术支持与服务。

可以在第一时间为用户提供比较先进的专业资讯和完备的产品和物流服务。 专业的技术力量使得我们能够为广大用户提供强大的技术支持，深厚的人脉资源使得我们在全国主要城市拥有众多的合作伙伴，安培生物非常荣幸能将世界上先进的高科技产品推荐给国内从事生物学领域科研的老师和同仁。作为专业性的产品供应商，公司出资存备了大量现货，配合优秀的销售队伍以及专业的技术支持，随时为客户提供服务。