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Tamoxifen诱导Cre-ERT2小鼠 使用指南

时间:2024-06-20      阅读:2595

Cre-ERT2小鼠是一类含有雌激素受体的配体结合区突变体(ERT)与cre重组酶的融合蛋白表达的小鼠。Cre-ERT2在无Tamoxifen诱导的情况下,在细胞质内处于无活性状态;当Tamoxifen诱导后,Tamoxifen的代谢产物4-OHT(雌激素类似物)与ERT结合,可使Cre-ERT2进核发挥Cre重组酶活性。


Tamoxifen给药建议如下:

Tamoxifen诱导Cre-ERT2小鼠 使用指南

3. 他莫昔芬的给药方式

他莫昔芬可以通过腹腔注射、灌胃、饮食或饮水等途径给药,应用比较广的是腹腔注射给药,腹腔注射的给药剂量精准,便于控制。

腹腔注射给药流程:正确抓取小鼠,将小鼠的鼻子朝向地面,露出腹部;定位动物的中线并将腹部分成四个象限,特别是动物的右下象限,是腹腔注射的合适位置(右下象限缺少重要的解剖结构);多次腹腔注射时,应交替注射部位。

Tamoxifen诱导Cre-ERT2小鼠 使用指南

注:Tamoxifen会影响胎儿发育和生产,孕鼠诱导的时间尽量选择孕晚期,并同时注射孕酮来减少流产概率。

灌胃给药的给药剂量和频率与腹腔注射相同,在正式实验前,建议同学们先反复练习,熟练掌握灌胃给药的技巧。

饮食/饮水给药使用较少,主要是他莫昔芬水溶性差,小鼠的给药剂量不好量化,且需要的诱导时间较长(一般需要几周进行诱导),在诱导期间往往还伴随着小鼠体重的下降(约10-15%)。


4. 注意事项

A. 他莫昔芬注射完成后不建议立刻开展实验,一般来讲,停药后需要继续饲养7天,再安排后续实验。

B. 对照组小鼠需要同步进行不含他莫昔芬的玉米油溶液给药。

C. 未处理的小鼠需要和注射他莫昔芬的小鼠分笼饲养,小鼠舐舔到他莫昔芬悬液,梳毛等行为可能导致意外敲除。

D. 加热不会导致Tamoxifen失效,37℃过夜溶解他莫昔芬是没有问题的。

最后,不同的实验方案、不同的小鼠品系、不同的组织器官等对于给药剂量、给药频率和给药方式等的要求往往是不同的,因此,上述方法只是一个参考,面对具体实验时,同学们还应根据参考文献、实验经验先进行预实验,以确定最佳方案。

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